Hoorcolleges 6-12 infectieziekten

HC6: Diagnostiek van infectieziekten
Diagnostiek
Ideale diagnostische test?




“Gouden standaard” benadert 100% sensitiviteit en specificiteit

Sample keuze
Waar zit de pathogeen in het lichaam: pathogenese, levenscyclus (sample nemen voor diagnose)

Norovirus - darminfectie → sample?
Coronavirus - luchtweginfectie → sample?




Varkenslintworm: Taenia Solium
Welke sample moet je nemen om cysticercosis te diagnosticeren?




Diagnostiek van infectieziekten
1: Pathogeen
Micro- (macro) scopisch detectie van pathogeen

2: Pathogeen-producten
DNA, RNA detectie
Antigenen, toxines

3: Antilichamen detectie tegen pathogeen (infectie)

,1: Pathogeen - microscopie
Kleuring malariaparasiet




Welke soort lintworm: Taenia solium of Taenia saginata?
Microscopie - specificiteit kan een probleem zijn

Voordeel:
• Snel, indien kweken niet nodig is
• Wellicht andere pathogenen detecteren

Nadeel:
• Getrand ‘oog’ nodig
• Hoeveel samples per dag?
• Sensitiviteit (kan een probleem zijn)
• Specificiteit (kan een probleem zijn)



2: Pathogeenproducten
DNA, RNA detectie
→ polymerase chain reaction (PCR)

Conventionele PCR - exponentiële amplificatie van DNA fragment

,2: Pathogeenproducten - PCR




2: Pathogeenproducten - conventionale PCR
Conventionele PCR uitslag: wel of niet geïnfecteerd




2: Pathogeenproducten - reverse transcriptase PCR (TC-PCR)
Conventionale PCR: exponentiële amplificatie van RNA fragment via cDNA met Reverse Transcriptase
(RT)

2: Pathogeenproducten - Real-time PCR: quantificeren infectie




Quantificeren van ‘input’ DNA of RNA
• Fluorofoor (fluorescentie moleculen)
• Fluorescentie intensiteit correleert met hoeveelheid PCR product
• Fluorescentie intensiteit gemeten na elke cyclus

, Diagnostiek van infectieziekten
2: Pathogeenproducten
DNA, RNA detectie
antigenen, toxines detectie

2: Pathogeenproducten - ELISA
Antigenen, toxines detectie
Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay (ELISA)




Productie detectie-antilichamen