Immunologie - Theorie voor de praktijk
Rik Schelbergen
Organisatie celkweek basis
- Er zijn 5 lessen van 4 lesuren.
Celkweek
- Dierlijke celkweek hechtende cellen en suspensiecellen
- Doorzetten / passeren cellen
- Invriezen / opstarten cellen
Immunologie
- Flow cytometrie: aan de buitenkant van een membraan de eiwitten karaktiseren
- Antigeenpresentatie met ELISA: deze wordt digitaal afgenomen in de vorm van een
opdracht
- Cytotoxiciteitassay met MTT
Voorbereiding: bekijken van de planning via onderwijs online
Let op: je werkt in dit geval alleen in ene eigen flowchart
Er staat in je flowchart een eigen bakje met spullen die je nodig hebt tijdens de immuno
praktijklessen
Let op: je gebruikt hier je eigen labjas en labbril.
Maak labjournaals voor de experimenten
- Labjournaals in labarchives
Er zijn 2 delen: het celkweekgedeelte en immunologische experimenten
- Celkweek is vooral bijhouden. Je hoeft geen analyse te doen. Hooguit observaties en
andere nuttige informatie
Deadlines spreek je af met de docent. Deze lever je in via labarchives.
Celkweek
Het kweken van cellen in vitro (in een kweekfles): dit is in een steriele omgeving
- Vrijhouden van besmetting is belangrijk. Besmetting = ongewenste invloed op je
cellen, zoals andere micro-organismen die je cellen beïnvloeden of doodmaken
Om deze reden is het belangrijk om nauwkeurig, netjes en steriel te werken
- Het grootste gevaar voor besmetting ben jezelf! Je moet dus altijd goed opletten!
Om zo steriel mogelijk te werken werk je in een flow cabinet. Dit is een bescherming voor de
laborant en voor de kweekcellen
Opzoeken hoe flowkasten werken!
T25 – T75 en T175 cm2 celkweekflessen om mee te kweken.
Heeft te maken met de oppervlakte van de celkweekflessen.
Soms gebruik je ook wel Wells-platen. Deze gebruik je voor experimenten in een kleiner
oppervlak.
Cellijnen (kan je langer in kweek houden) kunnen onderverdeeld worden in:
, - Hechtend, ze hechten aan de bodem van de kweekfles. Je kan ze goed zien met de
microscoop
- Suspensie, ze hechten dan niet aan de bodem van de kweekfles.
Primaire cellen zijn cellen die direct van een patiënt of tumor afkomt.
Gebruikte cellijnen: Muis T-cel groeit snel en groeit goed. Is gevoelig voor bepaalde
immunologische stoffen. Meer uitleg in andere lessen
Er zijn veel verschillende cellijnen waardoor je altijd voor een andere cellijn gebruik kan
maken. Je gaat de 2 hechtende en de enkele suspensie met elkaar vergelijken
Medium waar ze in groeien is Dmen
Medium = vloeistof waar cellen in groeien
Je moet medium voorbereiden door de rode dingen toe te voegen (zie protocol)
- Energiebron (glucose). Hiermee verkrijgen de cellen energie
- Aminozuren (meestal glutamine, zorgt voor extra groei).
- Vitamines, ligt aan de soort celgroei
- Antibiotica, moet eigenlijk altijd worden toegevoegd om besmetting te voorkomen.
In dit geval voeg je penicilline en streptomycine toevoegen. Hierdoor groeien de
bacteriën niet teveel ondanks een besmetting.
- pH indicator (fenol rood), zo weet je als onderzoeker meer over besmettingen,
uitputtingen. Je moet dan kijken naar kleurveranderingen.
- inorganische zouten voor de osmose regulatie
- Serum (tussen de 2,5 en 10%) – FCS
hoe meer je toevoegt hoe sneller de groei is
dit is belangrijk voor de hechting van cellen
is een mix van groeifactoren, hormonen, mineralen en lipiden
vaak een restproduct van kalveren uit slachthuizen = dierlijk materiaal
, je gaat de cellen vaak doorzetten, omdat de
grote flessen dan te vol raken
volle laag cellen = monolayer of 100%
confluent
dit vertelt wat over de groeifase van cellen
op een bepaald punt gaat de groei sneller,
doordat er bepaalde stoffen worden
uitgescheiden waardoor de groei sneller
gaat. Dit doe je om te voorkomen dat cellen
elkaar overgroeien.
apoptose / metose (andere cellen tot
apoptose dwingen)
Suspensiecellen kun je verdunnen door extra
medium toe te voegen.
Voor hechtende cellen moet je ze eerst
losmaken, dit kan met een een celschraper
(RAW) of met trypsine (L929) die de
eiwitmembraan knipt waardoor er geen
hechting meer kan plaatsvinden.
Je kan dan beide methoden oefenen.
Trypsine is protease. Dit knipt eiwitten van de
membraan. De RAW cellen willen we uiteindelijk
bekijken kwa macrofagen die aanwezig zijn.
Trypsine is geen zeer gevaarlijke stof. Het is niet bijtend en het is geen grote concentratie.
Het is een protease, dus het kan eiwitten knippen.
Trypsine kan kwaad op de cellen, als je deze te lang bij de cellen laat. Er kan dan
membraanschade ontstaan, waardoor de cellen doodgaan.
Passerren/doorzetten van cellen
Je hoeft normaal niet te tellen. Je gebruikt vaak alleen 1:5 of 1:10.
Je verdunt ze dan 5x of 10x etc.
Suspensie:
Rik Schelbergen
Organisatie celkweek basis
- Er zijn 5 lessen van 4 lesuren.
Celkweek
- Dierlijke celkweek hechtende cellen en suspensiecellen
- Doorzetten / passeren cellen
- Invriezen / opstarten cellen
Immunologie
- Flow cytometrie: aan de buitenkant van een membraan de eiwitten karaktiseren
- Antigeenpresentatie met ELISA: deze wordt digitaal afgenomen in de vorm van een
opdracht
- Cytotoxiciteitassay met MTT
Voorbereiding: bekijken van de planning via onderwijs online
Let op: je werkt in dit geval alleen in ene eigen flowchart
Er staat in je flowchart een eigen bakje met spullen die je nodig hebt tijdens de immuno
praktijklessen
Let op: je gebruikt hier je eigen labjas en labbril.
Maak labjournaals voor de experimenten
- Labjournaals in labarchives
Er zijn 2 delen: het celkweekgedeelte en immunologische experimenten
- Celkweek is vooral bijhouden. Je hoeft geen analyse te doen. Hooguit observaties en
andere nuttige informatie
Deadlines spreek je af met de docent. Deze lever je in via labarchives.
Celkweek
Het kweken van cellen in vitro (in een kweekfles): dit is in een steriele omgeving
- Vrijhouden van besmetting is belangrijk. Besmetting = ongewenste invloed op je
cellen, zoals andere micro-organismen die je cellen beïnvloeden of doodmaken
Om deze reden is het belangrijk om nauwkeurig, netjes en steriel te werken
- Het grootste gevaar voor besmetting ben jezelf! Je moet dus altijd goed opletten!
Om zo steriel mogelijk te werken werk je in een flow cabinet. Dit is een bescherming voor de
laborant en voor de kweekcellen
Opzoeken hoe flowkasten werken!
T25 – T75 en T175 cm2 celkweekflessen om mee te kweken.
Heeft te maken met de oppervlakte van de celkweekflessen.
Soms gebruik je ook wel Wells-platen. Deze gebruik je voor experimenten in een kleiner
oppervlak.
Cellijnen (kan je langer in kweek houden) kunnen onderverdeeld worden in:
, - Hechtend, ze hechten aan de bodem van de kweekfles. Je kan ze goed zien met de
microscoop
- Suspensie, ze hechten dan niet aan de bodem van de kweekfles.
Primaire cellen zijn cellen die direct van een patiënt of tumor afkomt.
Gebruikte cellijnen: Muis T-cel groeit snel en groeit goed. Is gevoelig voor bepaalde
immunologische stoffen. Meer uitleg in andere lessen
Er zijn veel verschillende cellijnen waardoor je altijd voor een andere cellijn gebruik kan
maken. Je gaat de 2 hechtende en de enkele suspensie met elkaar vergelijken
Medium waar ze in groeien is Dmen
Medium = vloeistof waar cellen in groeien
Je moet medium voorbereiden door de rode dingen toe te voegen (zie protocol)
- Energiebron (glucose). Hiermee verkrijgen de cellen energie
- Aminozuren (meestal glutamine, zorgt voor extra groei).
- Vitamines, ligt aan de soort celgroei
- Antibiotica, moet eigenlijk altijd worden toegevoegd om besmetting te voorkomen.
In dit geval voeg je penicilline en streptomycine toevoegen. Hierdoor groeien de
bacteriën niet teveel ondanks een besmetting.
- pH indicator (fenol rood), zo weet je als onderzoeker meer over besmettingen,
uitputtingen. Je moet dan kijken naar kleurveranderingen.
- inorganische zouten voor de osmose regulatie
- Serum (tussen de 2,5 en 10%) – FCS
hoe meer je toevoegt hoe sneller de groei is
dit is belangrijk voor de hechting van cellen
is een mix van groeifactoren, hormonen, mineralen en lipiden
vaak een restproduct van kalveren uit slachthuizen = dierlijk materiaal
, je gaat de cellen vaak doorzetten, omdat de
grote flessen dan te vol raken
volle laag cellen = monolayer of 100%
confluent
dit vertelt wat over de groeifase van cellen
op een bepaald punt gaat de groei sneller,
doordat er bepaalde stoffen worden
uitgescheiden waardoor de groei sneller
gaat. Dit doe je om te voorkomen dat cellen
elkaar overgroeien.
apoptose / metose (andere cellen tot
apoptose dwingen)
Suspensiecellen kun je verdunnen door extra
medium toe te voegen.
Voor hechtende cellen moet je ze eerst
losmaken, dit kan met een een celschraper
(RAW) of met trypsine (L929) die de
eiwitmembraan knipt waardoor er geen
hechting meer kan plaatsvinden.
Je kan dan beide methoden oefenen.
Trypsine is protease. Dit knipt eiwitten van de
membraan. De RAW cellen willen we uiteindelijk
bekijken kwa macrofagen die aanwezig zijn.
Trypsine is geen zeer gevaarlijke stof. Het is niet bijtend en het is geen grote concentratie.
Het is een protease, dus het kan eiwitten knippen.
Trypsine kan kwaad op de cellen, als je deze te lang bij de cellen laat. Er kan dan
membraanschade ontstaan, waardoor de cellen doodgaan.
Passerren/doorzetten van cellen
Je hoeft normaal niet te tellen. Je gebruikt vaak alleen 1:5 of 1:10.
Je verdunt ze dan 5x of 10x etc.
Suspensie:
