Analyse practicum DNA/RNA
Uitwerking rapport labvaardigheden BGZ2022
BGZ2022
Jos Broers & Jonathan van Tilburg
, 1A: Hoe is DNA opgebouwd?
Deoxyribo-nucleic-acid, beter bekend als DNA is het belangrijkste bestanddeel van chromosomen met
gecodeerde erfelijke informatie. DNA is de drager van de genen. DNA is opgebouwd uit een dubbele streng
nucleotiden (biologielessen, 2012). Deze twee strengen nucleotiden vormen een dubbele helix. In deze
nucleotiden strengen liggen 3- eind en een 5- eind omgekeerd ten opzichte van elkaar (van der Schoot,2015).
Iedere dubbele helix bestaat uit een monosacharide desoxyribose molecuul, een fosfaatgroep en een van de
vier nucleïnebasen: (A)adenine, (T)thymine,(G)guanine en (C)cytosine. Deze stikstofbasen zijn verbonden door
waterstofbruggen. (A)adenine vormt met (T)thymine een brug en (G)guanine met (C)cytosine. Aan de
uiteindes van DNA zitten telomeren, deze zorgen voor de beschermingen van het DNA.
1B: Gegeven de volgende sequentie 5’-ATGTGCCTGATCATGC-3’
Hoe ziet de anti-parallelle streng eruit (vul in op de onderstaande stippels)?
5’-ATGTGCCTGATCATGC-3’
3’-TACACGGACTAGTACG-’5
1C: Via wat voor type bindingen zitten de beide DNA strengen aan elkaar?
A + T → Verbonden via 2 waterstofbruggen (OH)
G + C → Verbonden via 3 waterstofbruggen (OH)
1D: Via wat voor bindingen zitten de base in een enkele DNA streng aan elkaar?
Via covalente bindingen zitten de enkele DNA strengen aan elkaar gebonden
1E: Zoek zelf de verschillende methoden op en leg beknopt uit op welk principe de isolatie gebaseerd is:
1. Organic(Phenol-Chloroform)Extraction
Het doel hiervan is om de nucleïnezuren te scheiden van de eiwitten en de moleculen. Er wordt een
chloroform mengsel gemaakt wat gecentrifugeerd wordt, dit mengt niet met water. Hierdoor
ontstaan er 2 lagen en zal het DNA neerslaan, het RNA blijft wel in het water.
2. Non-Organic(ProteinaseKandSaltingout)
Dit begint met lysis afbraak van cellen of weefsels, dit is essentieel voor vernietiging van eiwitten, dit
maakt het vrijkomen van nucleïnezuren uit de kern mogelijk.
3. Chelex(IonExchangeResin)Extraction
Verbindingen verzuiveren door ion-uitwisseling. Het zorgt dat het DNA niet wordt beschadigd na het
koken en het bruikbaar blijft voor de PCR-reactie. Het zorgt voor binding aan kationen via mg2+.
4. FTAPaper
Het zorgt dat DNA langdurig bewaard kan blijven, door het lyseren van de eukaryote cellen. Dit zorgt
ervoor dat ze worden beschermd tegen omgevings- en enzymatische schade.
5. SilicaBased
DNA-scheiding door adsorptie van silica, door zouten en bepaalde pH-omstandigheden.
1F: Leg uit: waarvoor dient het gebruik van EDTA?
EDTA wordt gebruikt voor de ontgifting bij zware metaalgroepen, vrij calcium wordt dan gebonden en
verwijderd. Het kan andere stoffen vangen en vasthouden en het kan de pH waarde behouden.
2
Uitwerking rapport labvaardigheden BGZ2022
BGZ2022
Jos Broers & Jonathan van Tilburg
, 1A: Hoe is DNA opgebouwd?
Deoxyribo-nucleic-acid, beter bekend als DNA is het belangrijkste bestanddeel van chromosomen met
gecodeerde erfelijke informatie. DNA is de drager van de genen. DNA is opgebouwd uit een dubbele streng
nucleotiden (biologielessen, 2012). Deze twee strengen nucleotiden vormen een dubbele helix. In deze
nucleotiden strengen liggen 3- eind en een 5- eind omgekeerd ten opzichte van elkaar (van der Schoot,2015).
Iedere dubbele helix bestaat uit een monosacharide desoxyribose molecuul, een fosfaatgroep en een van de
vier nucleïnebasen: (A)adenine, (T)thymine,(G)guanine en (C)cytosine. Deze stikstofbasen zijn verbonden door
waterstofbruggen. (A)adenine vormt met (T)thymine een brug en (G)guanine met (C)cytosine. Aan de
uiteindes van DNA zitten telomeren, deze zorgen voor de beschermingen van het DNA.
1B: Gegeven de volgende sequentie 5’-ATGTGCCTGATCATGC-3’
Hoe ziet de anti-parallelle streng eruit (vul in op de onderstaande stippels)?
5’-ATGTGCCTGATCATGC-3’
3’-TACACGGACTAGTACG-’5
1C: Via wat voor type bindingen zitten de beide DNA strengen aan elkaar?
A + T → Verbonden via 2 waterstofbruggen (OH)
G + C → Verbonden via 3 waterstofbruggen (OH)
1D: Via wat voor bindingen zitten de base in een enkele DNA streng aan elkaar?
Via covalente bindingen zitten de enkele DNA strengen aan elkaar gebonden
1E: Zoek zelf de verschillende methoden op en leg beknopt uit op welk principe de isolatie gebaseerd is:
1. Organic(Phenol-Chloroform)Extraction
Het doel hiervan is om de nucleïnezuren te scheiden van de eiwitten en de moleculen. Er wordt een
chloroform mengsel gemaakt wat gecentrifugeerd wordt, dit mengt niet met water. Hierdoor
ontstaan er 2 lagen en zal het DNA neerslaan, het RNA blijft wel in het water.
2. Non-Organic(ProteinaseKandSaltingout)
Dit begint met lysis afbraak van cellen of weefsels, dit is essentieel voor vernietiging van eiwitten, dit
maakt het vrijkomen van nucleïnezuren uit de kern mogelijk.
3. Chelex(IonExchangeResin)Extraction
Verbindingen verzuiveren door ion-uitwisseling. Het zorgt dat het DNA niet wordt beschadigd na het
koken en het bruikbaar blijft voor de PCR-reactie. Het zorgt voor binding aan kationen via mg2+.
4. FTAPaper
Het zorgt dat DNA langdurig bewaard kan blijven, door het lyseren van de eukaryote cellen. Dit zorgt
ervoor dat ze worden beschermd tegen omgevings- en enzymatische schade.
5. SilicaBased
DNA-scheiding door adsorptie van silica, door zouten en bepaalde pH-omstandigheden.
1F: Leg uit: waarvoor dient het gebruik van EDTA?
EDTA wordt gebruikt voor de ontgifting bij zware metaalgroepen, vrij calcium wordt dan gebonden en
verwijderd. Het kan andere stoffen vangen en vasthouden en het kan de pH waarde behouden.
2
