lOMoARcPSD|36877979
Samenvatting MGOT dT2 colleges
Moleculair genetische onderzoekstechniek (Universiteit Utrecht)
Scan to open on Studeersnel
Studocu is not sponsored or endorsed by any college or university
Downloaded by hoi de jong ()
, lOMoARcPSD|36877979
MGOT
C. Elegans heeft ook transposons, geen P elementen
In c. elegans, lethaal fentoype LET1-….
Mutatie in cell lineages LIN 1-v….
In C elegans zorgt EMS voor mutaties in kiembaan.
RNAi = afweermechanisme van de cel om dubbelstrengs RNA te herkennen als iets wat weg moet
wordt afgebroken. RNAi wordt in elke cel van worm herkent en geprocessed door dicer enzym. mRNA
wordt herkent en wordt door RNAi mechanisme afgebroken. Wormen krijgen RNAi binnen door
transformatie van plasmide met gen van interesse naar bacterie.
Geen ras signalering? Geen vulva, te veel meerdere vulva’s.
zonder ras signalering dus geen vulva, maar eitjes kunnen wel gevormd worden en uitkomen, ze
kunnen alleen niet naar buiten, allemaal kleine wormpjes in de moederworm. supressor screen
Conditionele knockout muis, BicD2 wordt in specifiek weefsel (hersenen) uitgeschakeld, maar blijft
werken in de andere weefsels. Beide allelen BicD2 gemuteerd, maar niet lethaal fenotype
Expressie van gen remmen met shRNA’s, vervolgens transfecteren en fenotype bestuderen. Map7
grootste remming op spine formation. In practicum kijken welke van de drie gemixte shRNA’s het
meest efficiënt is.
Meeste knockout muizen zijn gemaakt via gene targeting, alternatief is Crispr cas 9. Vroeg in de
ontwikkeling de knockout aanbrengen zodat hele muis knockout is en niet alleen bepaalde cellen.
Inner cell mass van blastocyst, delenda stamcellen, genetische modificatie door inbrengen DNA
construct. Plasmide voor homologe recombinatie, verandering moet op genoom niveau zijn. Plasmide
moet homoloog zijn aan gen van interesse. Neo resistentie als positieve selectiemarker, verstoord ook
expressie van BicD2 door in exon te zitten. Midden in exon sequentie van neo resistentie, dus
normale BicD2 eiwit gemuteerd.
Transformatie bij bacteriën is transfectie bij zoogdieren. Vector inbrengen in cel via transfectie. In
sommige cellen homologen binden aan target sequentie. Neo resistentie gen in gen van interesse
(BicD2) Knock out allel. In zelfde vector bouw je ook nog dood gene in achter homologe sequentie.
Anders kan plasmide toevallig in genoom worden ingebracht en toevallig genen verstoren. Bij
homologen alleen stukje ertussen, anders waarschijnlijk ook death gene. Deze cellen worden
toegevoegd aan inner cell mass van wildtype muis. Mozaïk.
Genetisch gemodificeerde man kruisen met wildtype vrouwtje. Heterozygote knockout
nakomelingen. Mutatie dominant of recessief, anders nog één generatie doorkruisen. Zodat mutatie
homozygoot wordt. Homozygote knockout vaak lethaal, daarom conditionele knockout. neo
resistentie gen in intron ipv exon. wel verandering in genoom, maar komt niet tot expressie,
wildtype fenotype. Floxed allel. Loxp is herkenningssequentie voor cre recombinase om daar te
knippen. Knock in muis dat cre recombinase tot expressie brengt in neuronen, knipt op loxp sites, neo
resistentie gen eruit geknipt.
Stamcellen primaire cellen die nog niet terminaal gedifferentieerd zijn. Multipotent, kan nog alle
soorten darmcellen maken. Pluripotent, kan nog alle cellen vormen. Induced pluripotent stem cells,
gemaakt door onderzoekers. Oct4, sox2, klf4 en c-myc toevoegen met plasmides die coderen voor
Downloaded by hoi de jong ()
Samenvatting MGOT dT2 colleges
Moleculair genetische onderzoekstechniek (Universiteit Utrecht)
Scan to open on Studeersnel
Studocu is not sponsored or endorsed by any college or university
Downloaded by hoi de jong ()
, lOMoARcPSD|36877979
MGOT
C. Elegans heeft ook transposons, geen P elementen
In c. elegans, lethaal fentoype LET1-….
Mutatie in cell lineages LIN 1-v….
In C elegans zorgt EMS voor mutaties in kiembaan.
RNAi = afweermechanisme van de cel om dubbelstrengs RNA te herkennen als iets wat weg moet
wordt afgebroken. RNAi wordt in elke cel van worm herkent en geprocessed door dicer enzym. mRNA
wordt herkent en wordt door RNAi mechanisme afgebroken. Wormen krijgen RNAi binnen door
transformatie van plasmide met gen van interesse naar bacterie.
Geen ras signalering? Geen vulva, te veel meerdere vulva’s.
zonder ras signalering dus geen vulva, maar eitjes kunnen wel gevormd worden en uitkomen, ze
kunnen alleen niet naar buiten, allemaal kleine wormpjes in de moederworm. supressor screen
Conditionele knockout muis, BicD2 wordt in specifiek weefsel (hersenen) uitgeschakeld, maar blijft
werken in de andere weefsels. Beide allelen BicD2 gemuteerd, maar niet lethaal fenotype
Expressie van gen remmen met shRNA’s, vervolgens transfecteren en fenotype bestuderen. Map7
grootste remming op spine formation. In practicum kijken welke van de drie gemixte shRNA’s het
meest efficiënt is.
Meeste knockout muizen zijn gemaakt via gene targeting, alternatief is Crispr cas 9. Vroeg in de
ontwikkeling de knockout aanbrengen zodat hele muis knockout is en niet alleen bepaalde cellen.
Inner cell mass van blastocyst, delenda stamcellen, genetische modificatie door inbrengen DNA
construct. Plasmide voor homologe recombinatie, verandering moet op genoom niveau zijn. Plasmide
moet homoloog zijn aan gen van interesse. Neo resistentie als positieve selectiemarker, verstoord ook
expressie van BicD2 door in exon te zitten. Midden in exon sequentie van neo resistentie, dus
normale BicD2 eiwit gemuteerd.
Transformatie bij bacteriën is transfectie bij zoogdieren. Vector inbrengen in cel via transfectie. In
sommige cellen homologen binden aan target sequentie. Neo resistentie gen in gen van interesse
(BicD2) Knock out allel. In zelfde vector bouw je ook nog dood gene in achter homologe sequentie.
Anders kan plasmide toevallig in genoom worden ingebracht en toevallig genen verstoren. Bij
homologen alleen stukje ertussen, anders waarschijnlijk ook death gene. Deze cellen worden
toegevoegd aan inner cell mass van wildtype muis. Mozaïk.
Genetisch gemodificeerde man kruisen met wildtype vrouwtje. Heterozygote knockout
nakomelingen. Mutatie dominant of recessief, anders nog één generatie doorkruisen. Zodat mutatie
homozygoot wordt. Homozygote knockout vaak lethaal, daarom conditionele knockout. neo
resistentie gen in intron ipv exon. wel verandering in genoom, maar komt niet tot expressie,
wildtype fenotype. Floxed allel. Loxp is herkenningssequentie voor cre recombinase om daar te
knippen. Knock in muis dat cre recombinase tot expressie brengt in neuronen, knipt op loxp sites, neo
resistentie gen eruit geknipt.
Stamcellen primaire cellen die nog niet terminaal gedifferentieerd zijn. Multipotent, kan nog alle
soorten darmcellen maken. Pluripotent, kan nog alle cellen vormen. Induced pluripotent stem cells,
gemaakt door onderzoekers. Oct4, sox2, klf4 en c-myc toevoegen met plasmides die coderen voor
Downloaded by hoi de jong ()
