Deel 1: Kweekcondities
Bij celkweek is het belangrijk dat cellen zich zo gezond mogelijk gedragen. Dat betekent dat je de
omstandigheden waarin je kweekt, zoals temperatuur, pH, zuurstof en medium moet afstemmen op
wat cellen in het lichaam gewend zijn.
Wanneer je cellen in vitro kweekt, moet je hun omgeving actief controleren. Wanneer we het over
kweekcondities hebben, bedoelen we hiermee alle omstandigheden die nodig zijn om cellen gezond
te houden in vitro. Deze condities zijn:
• Temperatuur
• pH
• Gasbalans (O2, CO2)
• Luchtvochtigheid
• Medium samenstelling
• Cel dichtheid
Temperatuur
De meeste humane cellen voelen zich het prettigst bij ongeveer 37 graden.
Te warm -> cel stress, eiwitschade, celdood
Te koud -> lagere deling, vertraagd metabolisme
Gasbalans
De CO2 wordt in de incubator ingesteld op 5%. Dit helpt de pH van het medium stabiel te houden.
De standaardlucht bevat ongeveer 21% O2, maar in het lichaam, waar de meeste eukaryote cellen
zich bevinden, ligt de zuurstofconcentratie vaak veel lager. In goed doorbloedde weefsels ligt de O2-
concentratie relatief hoog (rond de 5% tot 10%), terwijl in het in weefsels zoals de hersenen en het
kraakbeen rond de 5% ligt. Het variëren van de O2-concentratie in lucht kan dan ook de fysiologische
omstandigheden beter nabootsen en heeft invloed op het gedrag en de overleving van cellen. In het
lichaam is het zuurstofgehalte lager dan in de lucht, dus sommige cellen reageren gevoelig op
zuurstofschommelingen. In een standaard incubator werk je met de normale hoeveelheid zuurstof
(21%)
De standaard instellingen van de incubator zijn dus 21% O2 en 5% CO2.
Luchtvochtigheid
De hoge luchtvochtigheid in een incubator (95%) voorkomt dat het medium te snel verdampt.
Verdamping zou namelijk de zoutconcentratie en pH verstoren, wat schadelijk kan zijn voor de cellen.