Toets biotechnologie OP2 2019
Elektroforese en filtratie
Wat is SDS-PAGE?
Dit is een elektroforese techniek, dat voor het
denatureren (= strekken) en karakteriseren van eiwitten
dient (= scheiden op grootte molecuulmassa).
Wat is een monsterbuffer?
Dit is een buffer dat toegevoegd wordt vóór het verhitting
om de S-bruggen en H-bruggen te verbreken.
De monsterbuffer bestaat uit:
β-mercapto-ëthanol
SDS
Broomphenol blauw
Tris EDTA pH 8,0 (= buffer)
Wat is de functie van β-mercapto-ëthanol?
Dit verbreekt de S-S-bruggen in eiwitten. Een eiwit valt
zo uiteen in meerdere polypeptiden ketens.
Wat is SDS?
(Sodiumdodecylsulfaat)Het verbreekt de H-bruggen en de
ladingen van de restgroepen van de aminozuren worden
afgeschermd eiwitten krijgen een IDENTIEKE vorm.
(alle eiwitten hebben dezelfde ladingsdichtheid)
Wat kleur je met broomphenol blauw?
, Je kleurt hiermee:
de vloeistof (zodat je weet waar er in de
slotjes in de gel gepipetteerd
wordt).
het is een frontmarker (geeft aan waar de snelste
eiwitten zitten).
(Dit wordt meestal aan de monsterbuffer toegevoegd om de
monsters eenvoudiger in de slotjes van de gel te kunnen
pipetteren en om optisch te kunnen controleren waar het
front van de elektroforese is.)
HET KLEURT NIET DE EIWITTEN!!!
Blotten
Je krijgt een figuur waarin de cut – off waarde bekend is
en waarin 3 verschillende kD moleculen in een
eiwitsuspensie zitten.
Geef de + en – pool aan en laat zien (dmv kD) hoe groot de
moleculen zijn (molecuul massa).
Door de bolling aan de
onderkant kun je zien
dat het naar beneden
loopt,
dus + pool beneden.
150 KD Ladderpunt: 4,7,8
dikkere streep.
BEGIN van de gel kan
donkerder zijn door de
blauwe kleur.
Schetsen hoe na elektroforese de oorspronkelijke eiwit
suspensie eruit ziet, filtraat en concentraat
Elektroforese en filtratie
Wat is SDS-PAGE?
Dit is een elektroforese techniek, dat voor het
denatureren (= strekken) en karakteriseren van eiwitten
dient (= scheiden op grootte molecuulmassa).
Wat is een monsterbuffer?
Dit is een buffer dat toegevoegd wordt vóór het verhitting
om de S-bruggen en H-bruggen te verbreken.
De monsterbuffer bestaat uit:
β-mercapto-ëthanol
SDS
Broomphenol blauw
Tris EDTA pH 8,0 (= buffer)
Wat is de functie van β-mercapto-ëthanol?
Dit verbreekt de S-S-bruggen in eiwitten. Een eiwit valt
zo uiteen in meerdere polypeptiden ketens.
Wat is SDS?
(Sodiumdodecylsulfaat)Het verbreekt de H-bruggen en de
ladingen van de restgroepen van de aminozuren worden
afgeschermd eiwitten krijgen een IDENTIEKE vorm.
(alle eiwitten hebben dezelfde ladingsdichtheid)
Wat kleur je met broomphenol blauw?
, Je kleurt hiermee:
de vloeistof (zodat je weet waar er in de
slotjes in de gel gepipetteerd
wordt).
het is een frontmarker (geeft aan waar de snelste
eiwitten zitten).
(Dit wordt meestal aan de monsterbuffer toegevoegd om de
monsters eenvoudiger in de slotjes van de gel te kunnen
pipetteren en om optisch te kunnen controleren waar het
front van de elektroforese is.)
HET KLEURT NIET DE EIWITTEN!!!
Blotten
Je krijgt een figuur waarin de cut – off waarde bekend is
en waarin 3 verschillende kD moleculen in een
eiwitsuspensie zitten.
Geef de + en – pool aan en laat zien (dmv kD) hoe groot de
moleculen zijn (molecuul massa).
Door de bolling aan de
onderkant kun je zien
dat het naar beneden
loopt,
dus + pool beneden.
150 KD Ladderpunt: 4,7,8
dikkere streep.
BEGIN van de gel kan
donkerder zijn door de
blauwe kleur.
Schetsen hoe na elektroforese de oorspronkelijke eiwit
suspensie eruit ziet, filtraat en concentraat
