RAPPORT
DNA ISOLATIE
13 MEI 2021
NAAM
I…
, GELELECTROFORESE
Gelelectroforese betekend letterlijk het voortbewegen van deeltjes door een
elektrische kracht en heeft dus als doel om moleculen, waaronder DNA/RNA-
moleculen en eiwitten, op basis van hun grootte en/ of lading te scheiden.
Als eerst is er een gel nodig waarover de moleculen
kunnen bewegen. Deze gel kan bestaan uit
verschillende soorten stoffen, maar bij de moderne
gels wordt meestal gebruik gemaakt van agarose of
polyacrylamide. In dit practicum is DNA
geïsoleerd, hierbij is agarose het best van
toepassing. De gel bestaat uit twee delen, een
staking gel waar de moleculen op worden
aangebracht, en een running gel waarover de
daadwerkelijke geleiding plaats vindt. Deze Figuur 1: Schematische weergave opstelling
gelelectroforese (links, zwart: kathode & rechts, rood:
agarose gel wordt in het reservoir geplaatst in anode).
combinatie met een bufferoplossing. Deze buffer zorgt voor een goede geleiding van
de stroom doorheen de gel.
Om de moleculen te laten voortbewegen is een elektrisch veld nodig. Hiervoor is een
kathode en een anode van toepassing. Bij de kathode vindt reductie plaats waardoor
deze negatief is geladen (zie figuur 1). Aan de overkant ligt de anode die, in
tegenstelling tot de kathode, positief is geladen.
Om te beginnen wordt het DNA door middel van restrictie-enzymen geknipt in
fragmenten. Deze DNA-fragmenten worden gekleurd door middel van de kleurstof
ethidium bromide die sterk reageert met DNA en dus een fluorescerende kleur
verkrijgt onder een UV-lamp. Zo kan makkelijk onderscheid gemaakt worden over
welk fragment het precies gaat. De DNA-fragmenten worden ter hoogte van de
kathode gepipetteerd in de gel. DNA heeft een negatief geladen ruggengraat door al
zijn fosfaatgroepen, dus wanneer het elektrisch veld wordt opgewekt verplaatsen de
fragmenten naar de anode, de positief geladen kant. De snelheid waarop de DNA-
fragmenten zich voortbewegen hangt af van de grootte; grotere moleculen zijn
2
Figuur 2: DNA-ladder (links)
vergeleken met verkregen
DNA ISOLATIE
13 MEI 2021
NAAM
I…
, GELELECTROFORESE
Gelelectroforese betekend letterlijk het voortbewegen van deeltjes door een
elektrische kracht en heeft dus als doel om moleculen, waaronder DNA/RNA-
moleculen en eiwitten, op basis van hun grootte en/ of lading te scheiden.
Als eerst is er een gel nodig waarover de moleculen
kunnen bewegen. Deze gel kan bestaan uit
verschillende soorten stoffen, maar bij de moderne
gels wordt meestal gebruik gemaakt van agarose of
polyacrylamide. In dit practicum is DNA
geïsoleerd, hierbij is agarose het best van
toepassing. De gel bestaat uit twee delen, een
staking gel waar de moleculen op worden
aangebracht, en een running gel waarover de
daadwerkelijke geleiding plaats vindt. Deze Figuur 1: Schematische weergave opstelling
gelelectroforese (links, zwart: kathode & rechts, rood:
agarose gel wordt in het reservoir geplaatst in anode).
combinatie met een bufferoplossing. Deze buffer zorgt voor een goede geleiding van
de stroom doorheen de gel.
Om de moleculen te laten voortbewegen is een elektrisch veld nodig. Hiervoor is een
kathode en een anode van toepassing. Bij de kathode vindt reductie plaats waardoor
deze negatief is geladen (zie figuur 1). Aan de overkant ligt de anode die, in
tegenstelling tot de kathode, positief is geladen.
Om te beginnen wordt het DNA door middel van restrictie-enzymen geknipt in
fragmenten. Deze DNA-fragmenten worden gekleurd door middel van de kleurstof
ethidium bromide die sterk reageert met DNA en dus een fluorescerende kleur
verkrijgt onder een UV-lamp. Zo kan makkelijk onderscheid gemaakt worden over
welk fragment het precies gaat. De DNA-fragmenten worden ter hoogte van de
kathode gepipetteerd in de gel. DNA heeft een negatief geladen ruggengraat door al
zijn fosfaatgroepen, dus wanneer het elektrisch veld wordt opgewekt verplaatsen de
fragmenten naar de anode, de positief geladen kant. De snelheid waarop de DNA-
fragmenten zich voortbewegen hangt af van de grootte; grotere moleculen zijn
2
Figuur 2: DNA-ladder (links)
vergeleken met verkregen
