Practicum 2
ADH-activiteit in gistcellen
, Voorbereidingsvragen
Vraag 1:
Glycinebuffer: 0,0645/0,2 x 3,1 = 0,1
Ethanol: 0,10/0,62 x 3,1 = 0,5
NAD+: 0,020/62x10^3 x 3,1 = 0,1
Aquadest: 1,9
Enzym: 0,5
----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Totaal: 3,1 mL oplossing
(C1 x V1 = C2 x V2)
Vraag 2:
Geoxideerd ADH (NAD+) absorbeert geen licht van 340 nm, en gereduceerd ADH (NADH) absorbeert
wel licht van 340 nm. Dit is te zien op de grafiek op blz. 30 van het practicum blokboek.
Inleiding
In dit practicum stellen we de ADH-activiteit in gistextracten vast. Dit doen we met behulp van een
spectrofotometer. Eerst testen we of we goede meetapparatuur hebben door een commercieel ADH
preparaat te testen met de spectrofotometer, en daarmee met verschillende aanvangscondities de
enzymactiviteiten in verschillende enzympreparaten te bepalen.
Daarna ijken we de spectrofotometer met behulp van een met demiwater gevuld cuvetje, om de
eigenlijke proef goed uit te kunnen voeren.
Voor de eigenlijke proef vullen we een aantal cuvetten volgens het pipetteerschema op het werkblad.
Vervolgens voegen we een voor een aan deze cuvetten 0,5 mL enzympreparataat toe en meten we de
absorptie als functie van de tijd, door elke 15 sec. de absorptie van het mengsel te bepalen. Dit doen we
gedurende 2,5 min. De meetpunten zetten we uit op grafiekpapier, en zo kunnen we onder andere de
aanvangssnelheid (ΔA/min) van de enzymactiviteit bepalen.
Voor de derde proef zorgen we dat ADH vrij komt uit gistcellen, door de gistcellen met glasparels te
schudden. Indien de reactie te snel gaat, omdat de hoeveelheid ADH te groot is, passen we een
verdunningsreeks toe op het gistextract. Vervolgens meten we op dezelfde manier als het vorige
experiment de enzymactiviteit van ADH en de hoeveelheid ADH in de gistcellen.
ADH-activiteit in gistcellen
, Voorbereidingsvragen
Vraag 1:
Glycinebuffer: 0,0645/0,2 x 3,1 = 0,1
Ethanol: 0,10/0,62 x 3,1 = 0,5
NAD+: 0,020/62x10^3 x 3,1 = 0,1
Aquadest: 1,9
Enzym: 0,5
----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Totaal: 3,1 mL oplossing
(C1 x V1 = C2 x V2)
Vraag 2:
Geoxideerd ADH (NAD+) absorbeert geen licht van 340 nm, en gereduceerd ADH (NADH) absorbeert
wel licht van 340 nm. Dit is te zien op de grafiek op blz. 30 van het practicum blokboek.
Inleiding
In dit practicum stellen we de ADH-activiteit in gistextracten vast. Dit doen we met behulp van een
spectrofotometer. Eerst testen we of we goede meetapparatuur hebben door een commercieel ADH
preparaat te testen met de spectrofotometer, en daarmee met verschillende aanvangscondities de
enzymactiviteiten in verschillende enzympreparaten te bepalen.
Daarna ijken we de spectrofotometer met behulp van een met demiwater gevuld cuvetje, om de
eigenlijke proef goed uit te kunnen voeren.
Voor de eigenlijke proef vullen we een aantal cuvetten volgens het pipetteerschema op het werkblad.
Vervolgens voegen we een voor een aan deze cuvetten 0,5 mL enzympreparataat toe en meten we de
absorptie als functie van de tijd, door elke 15 sec. de absorptie van het mengsel te bepalen. Dit doen we
gedurende 2,5 min. De meetpunten zetten we uit op grafiekpapier, en zo kunnen we onder andere de
aanvangssnelheid (ΔA/min) van de enzymactiviteit bepalen.
Voor de derde proef zorgen we dat ADH vrij komt uit gistcellen, door de gistcellen met glasparels te
schudden. Indien de reactie te snel gaat, omdat de hoeveelheid ADH te groot is, passen we een
verdunningsreeks toe op het gistextract. Vervolgens meten we op dezelfde manier als het vorige
experiment de enzymactiviteit van ADH en de hoeveelheid ADH in de gistcellen.
