Practicum 3
ADH-zuivering
, Voorbereidingsvragen
Vraag 1: Hoe is de specifieke activiteit van een enzympreparaat gedefinieerd en in welke eenheid
wordt die weergegeven?
De enzym-activiteit wordt gedefinieerd als het katalytische effect van een enzym op een substraat.
De eenheid van de enzymactiviteit is µmol/min/mL
Vraag 2: Stel je meet onder Vmax-condities (wat is dat?), is er dan een maxiumum aan de te
bereiken activiteit, en zo ja wanneer wordt dit bereikt?
Vmax is de maximale reactiesnelheid. Deze is afhankelijk de affiniteit voor het substraat en hoe
gemakkelijk de katalyse verloopt. Wanneer Vmax bereikt is is de reactie in evenwicht, en is er een
maximum aan de te bereiken activiteit.
Vraag 3: Met behulp van de bufferformule van Henderson-Hasselbalch kan de elektrostatische
lading op de anionenwisselaar-kolom berekend worden.
pH = pK + log base/zuur pKa = 11,5
Laat door berekening zien wat bij pH = 7,0 de gemiddelde lading op de DEAE-groep zal zijn.
7,0 = 11,5 + log (x/1-x)
log (x/1-x) = -4.5
(x)/(1-x) = 10-4.5
x = 3,1 . 10-5 (1-x)
x = 3,1 . 10-5 – ((3,1 . 10-5)x)
x + ((3,1 . 10-5)x) = 3,1 . 10-5
1,0000316x = 3,1 . 10-5
x = 3,1 . 10-5
De lading van de DEAE-groep is dus 3,1 . 10-5
Isoelectrisch punt + of – bij pH 7,0 Binding aan kolom
Paardenlever-ADH 8,0 + nee
Gist-ADH 5,4 - ja
Albumine 4,7 - ja
Spier-LDH 8,3 + nee
Hemoglobine paard 7,7 + nee
Waarom is het bindingsgedrag van een eiwit aan de kolomvulling niet volledig voorspelbaar?
Een eiwit is niet volledig positief of negatief geladen. Het heeft 'compartimenten' die elk een andere
lading kunnen hebben.
ADH-zuivering
, Voorbereidingsvragen
Vraag 1: Hoe is de specifieke activiteit van een enzympreparaat gedefinieerd en in welke eenheid
wordt die weergegeven?
De enzym-activiteit wordt gedefinieerd als het katalytische effect van een enzym op een substraat.
De eenheid van de enzymactiviteit is µmol/min/mL
Vraag 2: Stel je meet onder Vmax-condities (wat is dat?), is er dan een maxiumum aan de te
bereiken activiteit, en zo ja wanneer wordt dit bereikt?
Vmax is de maximale reactiesnelheid. Deze is afhankelijk de affiniteit voor het substraat en hoe
gemakkelijk de katalyse verloopt. Wanneer Vmax bereikt is is de reactie in evenwicht, en is er een
maximum aan de te bereiken activiteit.
Vraag 3: Met behulp van de bufferformule van Henderson-Hasselbalch kan de elektrostatische
lading op de anionenwisselaar-kolom berekend worden.
pH = pK + log base/zuur pKa = 11,5
Laat door berekening zien wat bij pH = 7,0 de gemiddelde lading op de DEAE-groep zal zijn.
7,0 = 11,5 + log (x/1-x)
log (x/1-x) = -4.5
(x)/(1-x) = 10-4.5
x = 3,1 . 10-5 (1-x)
x = 3,1 . 10-5 – ((3,1 . 10-5)x)
x + ((3,1 . 10-5)x) = 3,1 . 10-5
1,0000316x = 3,1 . 10-5
x = 3,1 . 10-5
De lading van de DEAE-groep is dus 3,1 . 10-5
Isoelectrisch punt + of – bij pH 7,0 Binding aan kolom
Paardenlever-ADH 8,0 + nee
Gist-ADH 5,4 - ja
Albumine 4,7 - ja
Spier-LDH 8,3 + nee
Hemoglobine paard 7,7 + nee
Waarom is het bindingsgedrag van een eiwit aan de kolomvulling niet volledig voorspelbaar?
Een eiwit is niet volledig positief of negatief geladen. Het heeft 'compartimenten' die elk een andere
lading kunnen hebben.
