Theorie van de praktijk histologie les 1
-Van macroscopie naar microscopie:
>2D secties zijn afkomstig uit een 3D weefsel
*
-Morfologische kennis:
>Afbeeldingen interpreteren en vertalen naar de 3D-structuur
>Cortex
>Buitenste merg
>Binnenste merg
*
-Resolutie:
>LM (lichtmicroscopie): overzicht (afhankelijk van vergroting)
>EM (elektronenmicroscopie): ultrastructurele details (ultramicroscopie)
*
-Morfologie en resolutie:
>Hogere resolutie (afstand tussen 2 punten die je gescheiden van elkaar kan zien):
*Sectiedikte (dun voor resolutie, dik voor specifiek/activiteit)
*Type fixatief
*Hoe dunner je snijdt, hoe beter de resolutie
>
Made by: Iris Gülcher
, -De triangel:
> *Fixatie (crosslinkers) is met behulp van
stoffen de autolyse (verzuring van cellen)
stoppen
*Sterk fixeren (eiwit wordt veranderd) =
perfecte morfologie, slechte antigeniciteit
(eiwit helemaal veranderd)
*Zwak fixeren = goede antigeniciteit, slechte
en morfologie
*Beide krijg je bijna nooit
-Paraffinecoupes maken:
>Fixatie:
*Chemische vs fysieke fixatie (hitte/vriezen)
*Twee hoofdgroepen van chemische fixatieven:
~Coaguleren (bijv. ethanol, methanol, aceton)
~Niet-coagulerend (bijv. formaldehyde, glutaaraldehyde)
*Type fixatie beïnvloedt morfologie
*“Speciale recepten”:
~Bouin
~Zenker
~Alcoholische formaline
*Vierkante weefselblokken (ongeveer 1 cm in elke dimensie), of hele organen,
worden gefixeerd door chemische fixatie:
*De toegevoegde chemische stof bindt aan en verknoopt sommige eiwitten, en
denatureert andere eiwitten door uitdroging. Dit verhardt het weefsel en inactiveert
enzymen die anders het weefsel zouden kunnen aantasten. Fixatie doodt ook
bacteriën enz. Het kan ook weefselkleuring versterken.
*Het meest gebruikte fixeermiddel is een 4% waterige oplossing van formaldehyde,
bij neutrale pH.
>Dehydreren, ophelderen:
*Om coupes te snijden, moet het weefsel worden ingebed in paraffinewas, maar was
is niet oplosbaar in water of alcohol. Het is echter oplosbaar in een paraffine-
oplosmiddel dat 'xyleen' wordt genoemd. Daarom moet het water in het weefsel
worden vervangen door xyleen. Om dit te doen, moet het weefsel eerst worden
gedehydrateerd door het water in het monster geleidelijk te vervangen door
alcohol. Dit wordt bereikt door het weefsel door toenemende concentraties
ethylalcohol te leiden (van 0 tot 100%). Tot slot, zodra het water is vervangen door
100% alcohol, wordt de alcohol vervangen door xyleen/ultra clear, dat mengbaar is
met alcohol. Deze laatste stap wordt 'opruimen' genoemd.
*Weefselcassette
*Automatisering: Histoprocessor
~PATHOS – Histoprocessor
-Vol automatisch
-Snelle microgolf histoprocessor
-Voor maximaal 270 cassettes
-5 mm dikte
Made by: Iris Gülcher
-Van macroscopie naar microscopie:
>2D secties zijn afkomstig uit een 3D weefsel
*
-Morfologische kennis:
>Afbeeldingen interpreteren en vertalen naar de 3D-structuur
>Cortex
>Buitenste merg
>Binnenste merg
*
-Resolutie:
>LM (lichtmicroscopie): overzicht (afhankelijk van vergroting)
>EM (elektronenmicroscopie): ultrastructurele details (ultramicroscopie)
*
-Morfologie en resolutie:
>Hogere resolutie (afstand tussen 2 punten die je gescheiden van elkaar kan zien):
*Sectiedikte (dun voor resolutie, dik voor specifiek/activiteit)
*Type fixatief
*Hoe dunner je snijdt, hoe beter de resolutie
>
Made by: Iris Gülcher
, -De triangel:
> *Fixatie (crosslinkers) is met behulp van
stoffen de autolyse (verzuring van cellen)
stoppen
*Sterk fixeren (eiwit wordt veranderd) =
perfecte morfologie, slechte antigeniciteit
(eiwit helemaal veranderd)
*Zwak fixeren = goede antigeniciteit, slechte
en morfologie
*Beide krijg je bijna nooit
-Paraffinecoupes maken:
>Fixatie:
*Chemische vs fysieke fixatie (hitte/vriezen)
*Twee hoofdgroepen van chemische fixatieven:
~Coaguleren (bijv. ethanol, methanol, aceton)
~Niet-coagulerend (bijv. formaldehyde, glutaaraldehyde)
*Type fixatie beïnvloedt morfologie
*“Speciale recepten”:
~Bouin
~Zenker
~Alcoholische formaline
*Vierkante weefselblokken (ongeveer 1 cm in elke dimensie), of hele organen,
worden gefixeerd door chemische fixatie:
*De toegevoegde chemische stof bindt aan en verknoopt sommige eiwitten, en
denatureert andere eiwitten door uitdroging. Dit verhardt het weefsel en inactiveert
enzymen die anders het weefsel zouden kunnen aantasten. Fixatie doodt ook
bacteriën enz. Het kan ook weefselkleuring versterken.
*Het meest gebruikte fixeermiddel is een 4% waterige oplossing van formaldehyde,
bij neutrale pH.
>Dehydreren, ophelderen:
*Om coupes te snijden, moet het weefsel worden ingebed in paraffinewas, maar was
is niet oplosbaar in water of alcohol. Het is echter oplosbaar in een paraffine-
oplosmiddel dat 'xyleen' wordt genoemd. Daarom moet het water in het weefsel
worden vervangen door xyleen. Om dit te doen, moet het weefsel eerst worden
gedehydrateerd door het water in het monster geleidelijk te vervangen door
alcohol. Dit wordt bereikt door het weefsel door toenemende concentraties
ethylalcohol te leiden (van 0 tot 100%). Tot slot, zodra het water is vervangen door
100% alcohol, wordt de alcohol vervangen door xyleen/ultra clear, dat mengbaar is
met alcohol. Deze laatste stap wordt 'opruimen' genoemd.
*Weefselcassette
*Automatisering: Histoprocessor
~PATHOS – Histoprocessor
-Vol automatisch
-Snelle microgolf histoprocessor
-Voor maximaal 270 cassettes
-5 mm dikte
Made by: Iris Gülcher
