Theorie van de praktijk Immunologie les 1 blok 3:
-Belangrijk bij celkweek:
>Cellen onderhouden in steriele omgeving (in vitro)
*Bestemming= ongewenste invloed op je cellen
*Grootste gevaar voor besmetting ben jezelf
-Flow Cabinet:
>Safety laminated glass
>Sash level
>Armrest
>Leveling caster
>HEPA filter
>Blower
>LCD digital display panel
>Threshold structure & UV light leak free guard
-Cellen- cellijnen:
>Cellijnen kunnen onderverdeeld worden in:
*Hechtend
*Suspensie
>
Naam Type/Afkomst Hechtend/suspensie
RAW Muis macrofaag Hechtend
L929 Muis fibroblast Hechtend
D011.10 Muis T-cel Suspensie
-Medium-> vloeistof waar cellen in groeien:
>Bestandsdelen:
*Energiebron (glucose)
*Aminozuren:
~Meestal glutamine
~Verst toevoegen
*Vitamines
*Antibiotica:
~Penicilline/streptomycine
~Vers toevoegen
*pH-indicator (fenol rood)
*Inorganische zouten (o.a. osmose regulatie)
*Serum (Tussen 2,5-10%):
~Vers toevoegen
~FCS (Fetal Calf Serum)
~Bron van groeifactoren, hormonen, mineralen en lipiden.
~Belangrijk voor hechting van cellen
-Passeren/doorzetten van cellen:
>Volle laag cellen = monolayer of 100% confluent
>Vertelt wat over de groeifase van de cellen
Made by: Iris Gülcher
, >Suspensie vs. hechtende cellen
*Schrapen (RAW)
*Trypsine (L9292)
>1::10/ 1:…. Doorzetten
>
-Overige aandachtspunten:
>Vloeistoffen/medium toevoegen bij 37℃
>Spullen desinfecteren met 70% ethanol, eigen handen met sterilium
>Denk na voordat je de flowkast in gaat
>Overzichtelijk ingedeelde werkruimte
>Cellen regelmatig onder de microscoop controleren
-Besmetting:
>Mogelijke bronnen:
*Waterbad
*CO2 incubator (meestal 5%)
*Onderzoeker
>Meest voorkomend:
*Bacteriën
*Schimmels/gist
>Hoe te herkennen:
*Slechte groei
*Troebel medium bij hechtende cellen
*Microscopisch vaststellen
*Bij twijfel, vraag je docent
-Cellen tellen:
>Telkamer vs automatische celteller
>Fuchs Rosenthal / Burker Turk
>Cellen/ml= (N cellen)/((N hokjes*b*l*d) )∗1000∗VF
>Voeg Trypan Blue toe 1:1
*Verdunningsfactor = 2
*Welke cellen tel je / wat doet Trypan Blue?
*Blauwe (dode) en kleurloze (levende) cellen
1
>Dus cellen/ml = N cellen x 10.000
-
Made by: Iris Gülcher
-Belangrijk bij celkweek:
>Cellen onderhouden in steriele omgeving (in vitro)
*Bestemming= ongewenste invloed op je cellen
*Grootste gevaar voor besmetting ben jezelf
-Flow Cabinet:
>Safety laminated glass
>Sash level
>Armrest
>Leveling caster
>HEPA filter
>Blower
>LCD digital display panel
>Threshold structure & UV light leak free guard
-Cellen- cellijnen:
>Cellijnen kunnen onderverdeeld worden in:
*Hechtend
*Suspensie
>
Naam Type/Afkomst Hechtend/suspensie
RAW Muis macrofaag Hechtend
L929 Muis fibroblast Hechtend
D011.10 Muis T-cel Suspensie
-Medium-> vloeistof waar cellen in groeien:
>Bestandsdelen:
*Energiebron (glucose)
*Aminozuren:
~Meestal glutamine
~Verst toevoegen
*Vitamines
*Antibiotica:
~Penicilline/streptomycine
~Vers toevoegen
*pH-indicator (fenol rood)
*Inorganische zouten (o.a. osmose regulatie)
*Serum (Tussen 2,5-10%):
~Vers toevoegen
~FCS (Fetal Calf Serum)
~Bron van groeifactoren, hormonen, mineralen en lipiden.
~Belangrijk voor hechting van cellen
-Passeren/doorzetten van cellen:
>Volle laag cellen = monolayer of 100% confluent
>Vertelt wat over de groeifase van de cellen
Made by: Iris Gülcher
, >Suspensie vs. hechtende cellen
*Schrapen (RAW)
*Trypsine (L9292)
>1::10/ 1:…. Doorzetten
>
-Overige aandachtspunten:
>Vloeistoffen/medium toevoegen bij 37℃
>Spullen desinfecteren met 70% ethanol, eigen handen met sterilium
>Denk na voordat je de flowkast in gaat
>Overzichtelijk ingedeelde werkruimte
>Cellen regelmatig onder de microscoop controleren
-Besmetting:
>Mogelijke bronnen:
*Waterbad
*CO2 incubator (meestal 5%)
*Onderzoeker
>Meest voorkomend:
*Bacteriën
*Schimmels/gist
>Hoe te herkennen:
*Slechte groei
*Troebel medium bij hechtende cellen
*Microscopisch vaststellen
*Bij twijfel, vraag je docent
-Cellen tellen:
>Telkamer vs automatische celteller
>Fuchs Rosenthal / Burker Turk
>Cellen/ml= (N cellen)/((N hokjes*b*l*d) )∗1000∗VF
>Voeg Trypan Blue toe 1:1
*Verdunningsfactor = 2
*Welke cellen tel je / wat doet Trypan Blue?
*Blauwe (dode) en kleurloze (levende) cellen
1
>Dus cellen/ml = N cellen x 10.000
-
Made by: Iris Gülcher
