TRABAJO PRÁCTICO DE
INMUNOLOGÍA BÁSICA
-ELISA-
Lic. en Bioquímica
Universidad Nacional de San Luis
Profesora: Aida Mattar
Alumna: Agustina Gomina Carmona
Año: 2023
, 1.- ELISA. Investigar con el siguiente trabajo lo que significa el término
sensibilización. Defina.
La sensibilización es la fijación de un inmunorreactante en la fase sólida donde se realiza
un ensayo ELISA. La concentración óptima de sensibilización es aquella donde se alcanza
la mayor densidad óptica con los sueros estándares positivos y la menor con los sueros
negativos y el blanco reactivo, lo cual permite aumentar la sensibilidad del método. Una
sensibilización óptima de las placas disminuye las uniones inespecíficas reduciendo la
absorbancia o ruido de fondo debido a que se alcanza un alto recubrimiento de la fase
sólida.
Para una óptima sensibilización además deben tenerse en cuenta otros factores como el
material de la placa, generalmente PVC, el buffer utilizado y su pH y finalmente las
condiciones de incubación (tiempo, temperatura).
2.- ¿Qué soluciones pueden emplearse para el paso de bloqueo de la placa
sensibilizada?
Como buffers de bloqueo pueden utilizarse:
- Leche desnatada en polvo
- Albúmina de suero bovino (BSA)
- Gelatina de pescado
- Suero completo
- Caseína purificada
- Agentes bloqueantes comerciales
- Polivinilpirrolidina (PVP)
Todos ellos presentan pros y contras y se deben seleccionar dependiendo de la
disponibilidad y costo, de los anticuerpos utilizados, de la proteína de interés y del sistema
de detección ya que algunos pueden interferir o aumentar el ruido de fondo.
3.- Si deseamos determinar la presencia de proteínas que poseen grupos fosfatos en
su estructura como proteínas presentes en estado de activación, ¿será conveniente
elegir como solución bloqueante leche descremada?
No es conveniente utilizar leche descremada como agente de bloqueo porque la misma
contiene proteínas fosforiladas que pueden ser reconocidas por los anticuerpos
fosfoespecíficos, reaccionando de manera inespecífica y aumentando el ruido de fondo.
Además no se podrá discernir entre las proteínas fosforiladas de la muestra y las del
agente bloqueante.
INMUNOLOGÍA BÁSICA
-ELISA-
Lic. en Bioquímica
Universidad Nacional de San Luis
Profesora: Aida Mattar
Alumna: Agustina Gomina Carmona
Año: 2023
, 1.- ELISA. Investigar con el siguiente trabajo lo que significa el término
sensibilización. Defina.
La sensibilización es la fijación de un inmunorreactante en la fase sólida donde se realiza
un ensayo ELISA. La concentración óptima de sensibilización es aquella donde se alcanza
la mayor densidad óptica con los sueros estándares positivos y la menor con los sueros
negativos y el blanco reactivo, lo cual permite aumentar la sensibilidad del método. Una
sensibilización óptima de las placas disminuye las uniones inespecíficas reduciendo la
absorbancia o ruido de fondo debido a que se alcanza un alto recubrimiento de la fase
sólida.
Para una óptima sensibilización además deben tenerse en cuenta otros factores como el
material de la placa, generalmente PVC, el buffer utilizado y su pH y finalmente las
condiciones de incubación (tiempo, temperatura).
2.- ¿Qué soluciones pueden emplearse para el paso de bloqueo de la placa
sensibilizada?
Como buffers de bloqueo pueden utilizarse:
- Leche desnatada en polvo
- Albúmina de suero bovino (BSA)
- Gelatina de pescado
- Suero completo
- Caseína purificada
- Agentes bloqueantes comerciales
- Polivinilpirrolidina (PVP)
Todos ellos presentan pros y contras y se deben seleccionar dependiendo de la
disponibilidad y costo, de los anticuerpos utilizados, de la proteína de interés y del sistema
de detección ya que algunos pueden interferir o aumentar el ruido de fondo.
3.- Si deseamos determinar la presencia de proteínas que poseen grupos fosfatos en
su estructura como proteínas presentes en estado de activación, ¿será conveniente
elegir como solución bloqueante leche descremada?
No es conveniente utilizar leche descremada como agente de bloqueo porque la misma
contiene proteínas fosforiladas que pueden ser reconocidas por los anticuerpos
fosfoespecíficos, reaccionando de manera inespecífica y aumentando el ruido de fondo.
Además no se podrá discernir entre las proteínas fosforiladas de la muestra y las del
agente bloqueante.
