Tecnica Histologica
° Conjunto de operaciones a las que se somete una materia organizada (tejido biológico),
para que sea posible su estudio por medio del microscopio.
Microscopía Óptica
Procedimiento y etapas de la técnica histológica
1. Obtención del material
- Forma de obtención:
➢ Autopsia
➢ Biopsia incisional o excisional
➢ Punción aspiración con aguja fina (PAAF)
➢ Punción con aguja tipo tru-cut
➢ Biopsias dirigidas por endoscopia: laparoscopia, colonoscopia, fibrobroncoscopia
➢ Radiología intervencionista: punciones dirigidas por TAC o Ecografía
➢ Citología de fluidos o líquidos: lavado broncoalveolar, líquido ascítico o pleural, etc.
- Tamaño de las piezas:
Depende del poder de penetración del fijador a utilizar. En general, conviene fijar piezas
pequeñas, que no excedan los 0,5 a 1 cm3 de espesor.
- Volumen del fijador:
Debe ser 40 a 50 veces mayor que el de las piezas de material obtenidas. La pieza debe
quedar suspendida en el fijador, no en la superficie ni en el borde
- Duración de la fijación:
Depende del poder de penetración del fijador utilizado, al tamaño de la pieza a fijar y de la
temperatura de fijación. Por ejemplo: Flemming: 6 a 24 hs; Zenker, Helly, Duboscq-Brasil: 12 a
24 hs; Bouin: 1 a 3 días
2. Fijación
° Es un método histológico de preservación destinado a obtener preparados duraderos que
conservan la estructura morfológica y química de las células y tejidos al estado vivo
° Permite realizar procedimientos posteriores como coloración o de identificación que
facilitan el completo conocimiento de la estructura íntima.
- Cualidades de un fijador:
➢ Actuar con rapidez.
➢ Poseer alto poder de penetración.
➢ Conservar los detalles de la célula en vivo.
➢ Permitir el empleo de procedimientos necesarios para su observación posterior.
➢ Impedir la desaparición de los elementos solubles durante o después de la fijación.
➢ No provocar o impedir la formación de estructuras artificiales o falsas imágenes.
, ➢ Mantener la consistencia de los tejidos.
- Mecanismo de acción de los fijadores
Actúan según la naturaleza o composición de los mismos:
- Coagulando los prótidos, sin combinarse con ellos (alcohol, ácido pícrico, iodo, calor)
- Formando combinaciones químicas con las sustancias orgánicas (ácido crómico)
- Reduciéndose en contacto con las mismas y originando en su seno un precipitado
sumamente fino (ácido ósmico, bicloruro de mercurio, cloruro de oro).
- Clasificación de los fijadores
Fijadores químicos:
- Fijadores simples: formol 10%, alcohol etílico (96%), alcohol metílico, ácido ósmico,
bicloruro de mercurio
- Fijadores compuestos:: líquido de Fleming (mezcla cromio - osmio - acética), líquido
de Zenker (mezcla bicromato-sublimado acética), líquido de Helly (Zenker - Formol),
líquido de Bouin (mezcla picro - formol acética), líquido de Duboscq-Brasil (Bouin
alcohólico)
Fijadores físicos: desecación, calor seco, calor húmedo, frío, congelación y desecación
3. Lavado
Se realiza una vez cumplido el tiempo de la pieza en el fijador.
Su objetivo es eliminar los restos del fijador y frenar el proceso de fijación.
Habitualmente se usa agua.
4. Deshidratación
° Este proceso debe realizarse ya que las piezas están embebidas en agua del lavado por
lo que el tejido posee una gran proporción de agua, el material está blando, sin rigidez y el
agua impide el ingreso de la parafina.
° Los cambios de la deshidratación deben ser graduales para no producir alteraciones.
5. Aclaración
° Debido a que el alcohol no es solvente de la parafina, se debe aclarar el tejido usando uno
de los solventes existentes como: xilol, toluol, benceno, cloroformo, etc.
6. Inclusión en parafina
a) Penetración
° Se sumergen las piezas en la parafina a 52 - 56 ° de punto de fusión, mantenida en
forma de líquido a través de una estufa y colocados durante unos minutos cada uno
b) Inclusión definitiva
° En moldes de papel o de metal (barras de Leuckart) se vierte parafina fundida, del
mismo punto de fusión de la que ha servido para la penetración, calentándola previamente
a 60 - 65°. Se colocan las piezas orientándolas y se sumerge el molde parcialmente en agua
para que en 15 a 30 minutos la parafina se solidifique completamente.
° Conjunto de operaciones a las que se somete una materia organizada (tejido biológico),
para que sea posible su estudio por medio del microscopio.
Microscopía Óptica
Procedimiento y etapas de la técnica histológica
1. Obtención del material
- Forma de obtención:
➢ Autopsia
➢ Biopsia incisional o excisional
➢ Punción aspiración con aguja fina (PAAF)
➢ Punción con aguja tipo tru-cut
➢ Biopsias dirigidas por endoscopia: laparoscopia, colonoscopia, fibrobroncoscopia
➢ Radiología intervencionista: punciones dirigidas por TAC o Ecografía
➢ Citología de fluidos o líquidos: lavado broncoalveolar, líquido ascítico o pleural, etc.
- Tamaño de las piezas:
Depende del poder de penetración del fijador a utilizar. En general, conviene fijar piezas
pequeñas, que no excedan los 0,5 a 1 cm3 de espesor.
- Volumen del fijador:
Debe ser 40 a 50 veces mayor que el de las piezas de material obtenidas. La pieza debe
quedar suspendida en el fijador, no en la superficie ni en el borde
- Duración de la fijación:
Depende del poder de penetración del fijador utilizado, al tamaño de la pieza a fijar y de la
temperatura de fijación. Por ejemplo: Flemming: 6 a 24 hs; Zenker, Helly, Duboscq-Brasil: 12 a
24 hs; Bouin: 1 a 3 días
2. Fijación
° Es un método histológico de preservación destinado a obtener preparados duraderos que
conservan la estructura morfológica y química de las células y tejidos al estado vivo
° Permite realizar procedimientos posteriores como coloración o de identificación que
facilitan el completo conocimiento de la estructura íntima.
- Cualidades de un fijador:
➢ Actuar con rapidez.
➢ Poseer alto poder de penetración.
➢ Conservar los detalles de la célula en vivo.
➢ Permitir el empleo de procedimientos necesarios para su observación posterior.
➢ Impedir la desaparición de los elementos solubles durante o después de la fijación.
➢ No provocar o impedir la formación de estructuras artificiales o falsas imágenes.
, ➢ Mantener la consistencia de los tejidos.
- Mecanismo de acción de los fijadores
Actúan según la naturaleza o composición de los mismos:
- Coagulando los prótidos, sin combinarse con ellos (alcohol, ácido pícrico, iodo, calor)
- Formando combinaciones químicas con las sustancias orgánicas (ácido crómico)
- Reduciéndose en contacto con las mismas y originando en su seno un precipitado
sumamente fino (ácido ósmico, bicloruro de mercurio, cloruro de oro).
- Clasificación de los fijadores
Fijadores químicos:
- Fijadores simples: formol 10%, alcohol etílico (96%), alcohol metílico, ácido ósmico,
bicloruro de mercurio
- Fijadores compuestos:: líquido de Fleming (mezcla cromio - osmio - acética), líquido
de Zenker (mezcla bicromato-sublimado acética), líquido de Helly (Zenker - Formol),
líquido de Bouin (mezcla picro - formol acética), líquido de Duboscq-Brasil (Bouin
alcohólico)
Fijadores físicos: desecación, calor seco, calor húmedo, frío, congelación y desecación
3. Lavado
Se realiza una vez cumplido el tiempo de la pieza en el fijador.
Su objetivo es eliminar los restos del fijador y frenar el proceso de fijación.
Habitualmente se usa agua.
4. Deshidratación
° Este proceso debe realizarse ya que las piezas están embebidas en agua del lavado por
lo que el tejido posee una gran proporción de agua, el material está blando, sin rigidez y el
agua impide el ingreso de la parafina.
° Los cambios de la deshidratación deben ser graduales para no producir alteraciones.
5. Aclaración
° Debido a que el alcohol no es solvente de la parafina, se debe aclarar el tejido usando uno
de los solventes existentes como: xilol, toluol, benceno, cloroformo, etc.
6. Inclusión en parafina
a) Penetración
° Se sumergen las piezas en la parafina a 52 - 56 ° de punto de fusión, mantenida en
forma de líquido a través de una estufa y colocados durante unos minutos cada uno
b) Inclusión definitiva
° En moldes de papel o de metal (barras de Leuckart) se vierte parafina fundida, del
mismo punto de fusión de la que ha servido para la penetración, calentándola previamente
a 60 - 65°. Se colocan las piezas orientándolas y se sumerge el molde parcialmente en agua
para que en 15 a 30 minutos la parafina se solidifique completamente.
