Hoofdstuk 2
woensdag 16 november 2022
10:55
Wooclap
- Kanker ontstaat uit eigen lichaamscellen
- Kanker is soms een infectieziekte (= overdraagbaar van ene op ander, zoals HPV)
- Soms veroorzaakt door virusinfectie
- Soms erfelijk bepaald
- Kanker wordt bepaald door genetische veranderingen
> Chicken Sarcoma experiment
> Virus eigenschappen
- Replicatiemachinery gastheer (+ transcriptie/translatie). Virion weer infectieus
> RSV (Rous Sarcoma Virus) RNA virus
Fibroblasten normaal korte levensduur, na toevoegen virus cel transformatie. Cellen worden ronder
en groeien over elkaar
Temperatuurgevoelige mutant gemaakt (inactief bij hoge temperatuur) => Virusproduct blijft nodig
voor transformeren cellen
Eigenschappen
- Retrovirus
- ssRNA
- eiwitten:
> gag: structurele eiwitten van matrix
> pol: reverse transcriptase + integrase
> env: envelop eiwit (spike)
- secretie via budding
Lijkt op ALV, maar RSV heeft sarcoma gen => tumor inductie
Dit onderzocht: DNA probe gemaakt voor aantonen src en vervolgens testen in geïnfecteerde cellen
=> src gen in alle cellen aanwezig (dus niet specifiek voor RSV)
Model voor ontstaan RSV: ALV geïntegreerd in genoom naast het src gen. Hierdoor door foutje
meegenomen => RSV virion met src gen. Normaal cellulair gen wordt dus over geactiveerd.
> DNA virussen
SV40: klein, circulair DNA
Kanker in de mens: HBV/HPV/HSV/HTLV (T cel leukemie)
> Cel transformatie
, - Andere morfologie
- Verlies contact inhibitie
> Anchorage independent growth: groei zonder ECM hechting
(Normaal gesproken: anoiksis) = vorm van apoptose
- Blijven groeien
- Oneindig delen
- Geen mitogens nodig
- Hoge dichtheid cellen (groei dichter op elkaar)
- Geen stop celdeling
- Meer glucose transport (ontregeling metabolisme)
- Tumorigeniciteit (als ze in ander donor ook voor kanker zorgen)
> testen?
- probleem: immuunsysteem grote rol, ruimt cellen op
- 2 mogelijkheden: genetisch identieke dieren / immuun incompetente dieren
> Virus integratie gastheer genoom
- DNA virussen
> sucrose sedimentatie: moleculen gescheiden op molecuulmassa. Vervolgens fractie
scheiden en kijken waar virus zit. Overlap met cellulair DNA => integratie
- RNA virussen
> via RT wordt -DNA gemaakt, vervolgens dsDNA, integratie via integrase door
herkenning inverted repeats
> Ook niet transformerende retrovirussen zoals ALV kunnen ook tumor induceren, gaat langzamer
Insertie mutagenese: Virus hoeft niet per se oncogen te hebben, maar komt bijv. naast myc oncogen.
Hierdoor myc geactiveerd.
Hoofdstuk 4- Cellulaire oncogenen
woensdag 16 november 2022
10:55
> Chemische oncogen activatie
> Technieken
Southern blot: DNA knippen en scheiden over agarose gel. Op gel een filter en daarop papier, DNA
overgedragen op nitrocellulose filter. Filter incuberen met probe, bandje zichtbaar.
(RNA = northern, eiwit = western)
woensdag 16 november 2022
10:55
Wooclap
- Kanker ontstaat uit eigen lichaamscellen
- Kanker is soms een infectieziekte (= overdraagbaar van ene op ander, zoals HPV)
- Soms veroorzaakt door virusinfectie
- Soms erfelijk bepaald
- Kanker wordt bepaald door genetische veranderingen
> Chicken Sarcoma experiment
> Virus eigenschappen
- Replicatiemachinery gastheer (+ transcriptie/translatie). Virion weer infectieus
> RSV (Rous Sarcoma Virus) RNA virus
Fibroblasten normaal korte levensduur, na toevoegen virus cel transformatie. Cellen worden ronder
en groeien over elkaar
Temperatuurgevoelige mutant gemaakt (inactief bij hoge temperatuur) => Virusproduct blijft nodig
voor transformeren cellen
Eigenschappen
- Retrovirus
- ssRNA
- eiwitten:
> gag: structurele eiwitten van matrix
> pol: reverse transcriptase + integrase
> env: envelop eiwit (spike)
- secretie via budding
Lijkt op ALV, maar RSV heeft sarcoma gen => tumor inductie
Dit onderzocht: DNA probe gemaakt voor aantonen src en vervolgens testen in geïnfecteerde cellen
=> src gen in alle cellen aanwezig (dus niet specifiek voor RSV)
Model voor ontstaan RSV: ALV geïntegreerd in genoom naast het src gen. Hierdoor door foutje
meegenomen => RSV virion met src gen. Normaal cellulair gen wordt dus over geactiveerd.
> DNA virussen
SV40: klein, circulair DNA
Kanker in de mens: HBV/HPV/HSV/HTLV (T cel leukemie)
> Cel transformatie
, - Andere morfologie
- Verlies contact inhibitie
> Anchorage independent growth: groei zonder ECM hechting
(Normaal gesproken: anoiksis) = vorm van apoptose
- Blijven groeien
- Oneindig delen
- Geen mitogens nodig
- Hoge dichtheid cellen (groei dichter op elkaar)
- Geen stop celdeling
- Meer glucose transport (ontregeling metabolisme)
- Tumorigeniciteit (als ze in ander donor ook voor kanker zorgen)
> testen?
- probleem: immuunsysteem grote rol, ruimt cellen op
- 2 mogelijkheden: genetisch identieke dieren / immuun incompetente dieren
> Virus integratie gastheer genoom
- DNA virussen
> sucrose sedimentatie: moleculen gescheiden op molecuulmassa. Vervolgens fractie
scheiden en kijken waar virus zit. Overlap met cellulair DNA => integratie
- RNA virussen
> via RT wordt -DNA gemaakt, vervolgens dsDNA, integratie via integrase door
herkenning inverted repeats
> Ook niet transformerende retrovirussen zoals ALV kunnen ook tumor induceren, gaat langzamer
Insertie mutagenese: Virus hoeft niet per se oncogen te hebben, maar komt bijv. naast myc oncogen.
Hierdoor myc geactiveerd.
Hoofdstuk 4- Cellulaire oncogenen
woensdag 16 november 2022
10:55
> Chemische oncogen activatie
> Technieken
Southern blot: DNA knippen en scheiden over agarose gel. Op gel een filter en daarop papier, DNA
overgedragen op nitrocellulose filter. Filter incuberen met probe, bandje zichtbaar.
(RNA = northern, eiwit = western)
