,CLIOSCELLARE IPSINA: enzima producidel pancreas
#
X el
que se usa
para degradar las
de la matric extracelular
proteinas
o Primeros cultives:TEJIDOS y liberar a las celulas
· Clones: info genetica ↳ Jacil de adquirir X se inhibe con
↳ para obtenerlos debemos aislar T optima:37 suero/medio
una unica celula en un pocillo I disgrega el cultivo celular completo
o Ira linea celular:Hela
·
Sepueden hacer stocks de VIRUS en
celulas de cultivo (se replican) de in-vivo -> in-vitro
· Para
pasar se busca homogeneidad
en el
ensayo
Apricaciones del cultivo de cellas · Genomica:descubrir targets moleculares
·contaminaciones:cambio pH ylo turbidez de
!
-> productos biotech & ATCC:vende muchas vineas cellares caracterizadas
-> Anticuerpos ↳ sio si debemos authenticarlas 2-6 meses
-> Proteinas
-> Plantasy animales transgenicos pueden -bacterias
-> Ingenieria de tejidos ser -
nongos
-> Estudios Immunologicos otras lineas celulares
2
-
- Actividad intracelular
Estudian interacciones Lewla-illa:Dana
hay algin
-> ver si
-> Generacion de organoides target molecular nuevo como evitarlo:ANTIBIOTICOS
I Ensayos de migracione invasion
-> Estudio de replicacion y cido de vide de un virus
:Por que celulas y no
organismos?
·
Control preciso del ambiente:pH, To, humedad, radiacion (W2), p. osmotical, or, CO2
⑳?@. caracteristicas conocidas y
homogeneidad del cultivo:lneas celulares
·
Economia, escala y mecanizacion:menorc de compuesto a tester, ensayos a chica escala con
muchas variables y replicados
· Bioetica
·
Modelacion in-vitro de las condiciones in-vivo
Desventajas
·
Experiencia requerida:tecnica aseptica y de cultive
cantidad, esfuerzoy material requetide para producir cantidades tejide (muchas (s)
·
chicas de
Numeros:
·
-> pequena escala 2-3
personas:1-10 gr
-> mediana escala:10-100 gr
->
gran escala:>100gr (planta piloto a nivel industrial)
Las cewlas in-vitro caracteristicas
pierden del tejido de origen
fenotipicas
·
·
Inestabilidad: aneuploidia cromosomicax la rapida division in-vitro -
las cellulas van cambiande
Cadquieren caracteristicas genomicas)
CRIOPRESERVACION:mantener cultivo a
To con un agente criopreservante donde las cellas No
mveren
per la actividad metabolica es
muy baja
1)Freezer a -80°c
2) Tanque de Nitrogeno (mejor) -
120°
, Validacion Pasos a
seguir
cultivar
->
~
Autentificacion:fingerprinting/marcadores de superficie
~ Procedencia:quele ocurrie enzimas
linea desde que
a la se obtuve
x
~ Contaminaciones microbiologicas/otras ewlas
medio
->
+ sven
; quenecesito para cultivar?
incubart
autenticar
x
ensayos
EQUIDAMIENTO
biological 37°C
cabinesdeseguridad
To ESTABLE A
campanc de to lamine the
-
Incubadores de CO2 1) Todo
tempera bano
-
se a en
-
Instrumentos opticos termostatico a 37 c
-
Instalacion de criogenia
2) Las celulas en cultivo pueden
Lavadero y equipos de esterilizacion si son
-
soportar cambios deTo
-
Materiales descartables por debajo de la To corporal
del animal del que proceden
PROCEDIMIENTOS
INTERCAMBIO GASEOSO
Limpieza de
superficies
-
Limpizza Estufa gaseada:para mantener el pH
-
de equipos
-
-
selectivo de materiales
Descarte
-
Limpleza estricta y desinfeccion
Decontaminacion de materiales
-
SOPORTE - wgar donde crezen las cs.
cio elijo en funcion del tipo de cs)
NUTRIENTES - en
polvo/liquidos
Multipocillos/Multiwells:de 24,36,96,
-
...
Medios
enriquecidos Botellas (menor
riesgo de perder estenlidad)
- -
-
Suero fetal bovine can protein as
-
como albumina -
Placas p35, p60, p100, pSOb
Vitaminas Rollers
-
-
Medios quimicamente definidos (sin agregado svero
-
de
↳> se usan en produccion
FREEZERS E INSTALACIONES en
-
habitacion separada xq generan turbulencia y suciedad
-
Almacenamiento de medios (ex PBS)
-
Congeladores de -20°C para el svero, aditivos (glutamina, antibioticos) y soluciones enzimaticas
Stripsina, colagenasa, ...)
-
Almacenamiento de cewlas
ASEPSIA
Campanas de fujo laminar
-
-
Autoclave
-
Dispositivos de filtracion de 0.22 micras ->
para lo que no puede autodavarse
, 8 EI PBS no puede hervirse xqes inorganico:SEFILTRA
· un medio sveroconproteinas
+
puede hervirse (autoclave) xq
8
I
NO
·=
se desaturalizan: CENTRIFUGAS
UNICA FORMA FILTRACION
&
-> velocidades (2000rpm xq se
generan turbulencias sine
ESTERIHZACION I
congelar las cellas sin
permite
que semueran x la entrada de
1. POR CALOR a) colorseco -> horno electricola gas H20
b)calor humedo - autoclave
2) Incineracion -> mechers
2. PORRADIACION al No ionizante (UV)
b) Ionzante(gammal
3. POR AGENTESQUIMICOS a) gases (carbonoide)
70% para ToDo
por unahora + lvzov
->
b) alcohol loque ingress a
La
campana
4. POR FLTRACION a) porcelana
3) asbestos
vidrio
I
d) acetato de celulosa
e) nylon
VISUALIZACION
-
-
Microscopic invertido
-
Dentro de 4 categoria de cerulas pueden distinguirse los Itipos
No
-
cewlas potando:MUERTAS I despegadas para dividirse (redoditas)
-
Puntitus:bacterias
confluencia:espacio entre cwlas si deben dividirse
-
es del 90-100% en places para que
as celulas no se estresen (ex por falta de nutrientes)
cewlas "brillantes":estan plano ma's "elevado"xq pana dividirse y
despegan
-
en un se
wego se wuelven a
pegar al fondo de la placa
EQUIPOS DE PURIFCACION
principales contaminates del H20:a) cationes (sodio, calcio, hierro, magnesio y aniones
(bicarbonato, cowros, sulfatos)
organicos:taninos, ligninas, derivados deplantas
-
...
Particulas coloidales:debris
vegetal,Nocas, arena ...
4)Bacterias
e) Gases:Lac de O2 puede alterer reacciones
bloquimicas
yel Ne formal
burby as
METODOS DE PURIFICATION
1. Osmosis reversal destilacion
2. Filtros de carbon
isnot
3.Intercambiocation
#
X el
que se usa
para degradar las
de la matric extracelular
proteinas
o Primeros cultives:TEJIDOS y liberar a las celulas
· Clones: info genetica ↳ Jacil de adquirir X se inhibe con
↳ para obtenerlos debemos aislar T optima:37 suero/medio
una unica celula en un pocillo I disgrega el cultivo celular completo
o Ira linea celular:Hela
·
Sepueden hacer stocks de VIRUS en
celulas de cultivo (se replican) de in-vivo -> in-vitro
· Para
pasar se busca homogeneidad
en el
ensayo
Apricaciones del cultivo de cellas · Genomica:descubrir targets moleculares
·contaminaciones:cambio pH ylo turbidez de
!
-> productos biotech & ATCC:vende muchas vineas cellares caracterizadas
-> Anticuerpos ↳ sio si debemos authenticarlas 2-6 meses
-> Proteinas
-> Plantasy animales transgenicos pueden -bacterias
-> Ingenieria de tejidos ser -
nongos
-> Estudios Immunologicos otras lineas celulares
2
-
- Actividad intracelular
Estudian interacciones Lewla-illa:Dana
hay algin
-> ver si
-> Generacion de organoides target molecular nuevo como evitarlo:ANTIBIOTICOS
I Ensayos de migracione invasion
-> Estudio de replicacion y cido de vide de un virus
:Por que celulas y no
organismos?
·
Control preciso del ambiente:pH, To, humedad, radiacion (W2), p. osmotical, or, CO2
⑳?@. caracteristicas conocidas y
homogeneidad del cultivo:lneas celulares
·
Economia, escala y mecanizacion:menorc de compuesto a tester, ensayos a chica escala con
muchas variables y replicados
· Bioetica
·
Modelacion in-vitro de las condiciones in-vivo
Desventajas
·
Experiencia requerida:tecnica aseptica y de cultive
cantidad, esfuerzoy material requetide para producir cantidades tejide (muchas (s)
·
chicas de
Numeros:
·
-> pequena escala 2-3
personas:1-10 gr
-> mediana escala:10-100 gr
->
gran escala:>100gr (planta piloto a nivel industrial)
Las cewlas in-vitro caracteristicas
pierden del tejido de origen
fenotipicas
·
·
Inestabilidad: aneuploidia cromosomicax la rapida division in-vitro -
las cellulas van cambiande
Cadquieren caracteristicas genomicas)
CRIOPRESERVACION:mantener cultivo a
To con un agente criopreservante donde las cellas No
mveren
per la actividad metabolica es
muy baja
1)Freezer a -80°c
2) Tanque de Nitrogeno (mejor) -
120°
, Validacion Pasos a
seguir
cultivar
->
~
Autentificacion:fingerprinting/marcadores de superficie
~ Procedencia:quele ocurrie enzimas
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a la se obtuve
x
~ Contaminaciones microbiologicas/otras ewlas
medio
->
+ sven
; quenecesito para cultivar?
incubart
autenticar
x
ensayos
EQUIDAMIENTO
biological 37°C
cabinesdeseguridad
To ESTABLE A
campanc de to lamine the
-
Incubadores de CO2 1) Todo
tempera bano
-
se a en
-
Instrumentos opticos termostatico a 37 c
-
Instalacion de criogenia
2) Las celulas en cultivo pueden
Lavadero y equipos de esterilizacion si son
-
soportar cambios deTo
-
Materiales descartables por debajo de la To corporal
del animal del que proceden
PROCEDIMIENTOS
INTERCAMBIO GASEOSO
Limpieza de
superficies
-
Limpizza Estufa gaseada:para mantener el pH
-
de equipos
-
-
selectivo de materiales
Descarte
-
Limpleza estricta y desinfeccion
Decontaminacion de materiales
-
SOPORTE - wgar donde crezen las cs.
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NUTRIENTES - en
polvo/liquidos
Multipocillos/Multiwells:de 24,36,96,
-
...
Medios
enriquecidos Botellas (menor
riesgo de perder estenlidad)
- -
-
Suero fetal bovine can protein as
-
como albumina -
Placas p35, p60, p100, pSOb
Vitaminas Rollers
-
-
Medios quimicamente definidos (sin agregado svero
-
de
↳> se usan en produccion
FREEZERS E INSTALACIONES en
-
habitacion separada xq generan turbulencia y suciedad
-
Almacenamiento de medios (ex PBS)
-
Congeladores de -20°C para el svero, aditivos (glutamina, antibioticos) y soluciones enzimaticas
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-
Almacenamiento de cewlas
ASEPSIA
Campanas de fujo laminar
-
-
Autoclave
-
Dispositivos de filtracion de 0.22 micras ->
para lo que no puede autodavarse
, 8 EI PBS no puede hervirse xqes inorganico:SEFILTRA
· un medio sveroconproteinas
+
puede hervirse (autoclave) xq
8
I
NO
·=
se desaturalizan: CENTRIFUGAS
UNICA FORMA FILTRACION
&
-> velocidades (2000rpm xq se
generan turbulencias sine
ESTERIHZACION I
congelar las cellas sin
permite
que semueran x la entrada de
1. POR CALOR a) colorseco -> horno electricola gas H20
b)calor humedo - autoclave
2) Incineracion -> mechers
2. PORRADIACION al No ionizante (UV)
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3. POR AGENTESQUIMICOS a) gases (carbonoide)
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por unahora + lvzov
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b) alcohol loque ingress a
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campana
4. POR FLTRACION a) porcelana
3) asbestos
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I
d) acetato de celulosa
e) nylon
VISUALIZACION
-
-
Microscopic invertido
-
Dentro de 4 categoria de cerulas pueden distinguirse los Itipos
No
-
cewlas potando:MUERTAS I despegadas para dividirse (redoditas)
-
Puntitus:bacterias
confluencia:espacio entre cwlas si deben dividirse
-
es del 90-100% en places para que
as celulas no se estresen (ex por falta de nutrientes)
cewlas "brillantes":estan plano ma's "elevado"xq pana dividirse y
despegan
-
en un se
wego se wuelven a
pegar al fondo de la placa
EQUIPOS DE PURIFCACION
principales contaminates del H20:a) cationes (sodio, calcio, hierro, magnesio y aniones
(bicarbonato, cowros, sulfatos)
organicos:taninos, ligninas, derivados deplantas
-
...
Particulas coloidales:debris
vegetal,Nocas, arena ...
4)Bacterias
e) Gases:Lac de O2 puede alterer reacciones
bloquimicas
yel Ne formal
burby as
METODOS DE PURIFICATION
1. Osmosis reversal destilacion
2. Filtros de carbon
isnot
3.Intercambiocation
