InI TECNICO
W LlSB OA
Nome: N0_ _ __
Curso:_ _ _ _ _ _ __
1° Exame de Engenharia Genetica
14 de Janeiro de 2020; Duray30: 2h:30min
A bacteria Streptococcus pneurnoniae coloniza a nasofaringe humana, podendo causar infecyoes
que contribuem para 1,6 milh6es de mortes por ana no mundo. Muitas destas mortes resultam de
infecyoes secund,3rias causadas por S. pneumoniae apos a gripe sazonal ou pandemica. Embora
S. pneumoniae seja considerado um patogenico extracelular tipico , foi reconhecida recentemente
a sua capacidade de sobrevivencia intracelular. Apesar dos efeitos sinergicos entre 0 virus da
gripe A (IAV) e S. pneumoniae no estabelecimenfo de infecyoes bacterianas secundarias estar
bem documentado, 0 efeito da infecyao gripal na sobrevivencia intracelular de S. pneumoniae
nao e conhecido . Assim sendo , os autores deste trabalho estudaram a forma como a infecyao por
IAV afecta a sobrevivencia intracelular de S. pneumoniae usando um modelo de infecyao e
identificaram 0 sistema regulador de do is componentes, SirRH, como estando envolvido na
resposta bacteriana. Considere que a sequencia de nucleotidos do genoma da estirpe selvagem
S. pneumoniae R801 e conhecida . Nota : Multiplicidade da infecy30 (MOl) 30 significa: 30 virus
(ou bacterias) por celula eucariotica.
1- Para estudar se a infecyao pelo virus da gripe afectaria a sobrevivencia intracelular de S.
pneumoniae (Sp) , os autores estabeleceram um modele de infecyao para IAV-S. pneumoniae
usando pneumocitos A549 de origem humana. Para isso, infectaram as celulas A549 com
diferentes MOl do virus (1, 5, 10), incubaram durante 24 horas, apos as quais infectaram com
S. pneumonia R801 usando MOl de 30 e mediram 0 nivel de celulas A549
necroticas/apoptoticas. Os resultados estao na figura seguinte:
120
100 "1 r=, r'--1 r'--1 ,.=-, ,.=-, r'--1 r'--1 r'--1 o Apoptotic cells
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Com base nos resultados obtidos, qual e a melhor MOl de IAV para prosseguir os estudos?
Porque? (nao entre em considerayao com os resultados na presenya de Sp) (0.75 valores)
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V \;. V ~) <- CV;J"~-i'y~ \'wAA w.-v'-, ..0W~ 0 .e~+o cto--....
m-{ccc-~ ?d-o.- loO--J-CMA -Q.'Y\ ~o...ltLu Om 6 v:-AlvJ .
, 2- Para determinar a sobrevivencia intracelular de S. pneumoniae, foi utilizado 0 antibi6tico
gentamicina para eliminar as bacterias extracelulares, seguida da lavagem das celulas A549 e
da sua lise .
a) Experimentalmente, como podem determinar 0 numero de celulas bacterianas viaveis
libertadas a partir de celulas A549 lisadas? (0,5 valores)~ l
-f &th\'\Mv\ll~~ lo (\~ tit ~okAM~ \J(CAvu..S ..e ~~jQ ~~ p
1~CA.\J'\ do &; ~ U; ~ t2v...~V~ & LA (J~o mQ.u..Qo..A. -€ "'" I/1I\JJ.
O--~Ov\J..1:--oAo .
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'-'1») A figura seguinte most~ -;;"7e~~tadoSda CO=inTOCC;30 entre S. pneumoniae e IAV activo ou
inactivo pela aCC;30 do cal or.
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Descreva os resultados obtidos e refira as duas principais conclus6es (1.0 valor) ..f ,
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c) Para determinar se a sobrevivencia intracelular em celulas A549 infectadas com IAV era
dependente da estirpe bacteriana, testaram tambem as estirpes s. pneumoniae R6 e D39. Os
resultados obtidos foram semelhantes aos da estirpe R801. Com base nos valores do grafico de
2b), desenhe um grafico para as 3 estirpes e indique a importancia desta experienci\ (0.5 valores)
G(,)?D\ RC, 1)3~ (S~to- .R)c~...€"'~<'" 6iM~"t~~"tr\~ S.
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? d) De acordo com 2c) onde foram comparadas 3 estirpes, que experiencia controlo esta ainda em
falta? (0,5 valores)
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