Samenvatting inleiding chromatografie les 1
Basis, chromatografie en de aard van de fases.
- Concept scheidingsmethode met mobiele en stationaire fase.
- Stationaire fase staat stil (kolom)
- Mobiele fase loopt door de stationaire fase heen (eluens)
- De stof die langer in de kolom blijft ondervind meer retentie, door verschil
in retentie ontstaat de scheiding.
Retentiemechanismes en repaeted partition
- Hoe meer affiniteit de analiet heeft met de kolom, hoe later deze eruit
komt.
- Retentiemechanismes zijn verantwoordelijk voor de verschillen in
retentie die verschillende analieten ondervinden op een kolom. (5
retentiemechanismes)
1. Adsorptie Analieten met meer affiniteit voor de stationaire fase
blijven hier langer inzitten. (adsorptie analiet aan kolom)
2. Partition (verdeling) Er vormt zich een evenwicht tussen hoe veel tijd
een monster zich in de mobiele of stationaire fase zal bevinden.
(monster kan in beide fases gaan zitten) (verdeling opgeloste stoffen
tussen 2 vloeistoffases)
3. Size-exclusion Moleculaire zeefwerking een monster wordt
aangebracht met moleculen van verschillende groottes, kleine
moleculen ondervinden meer retentie want deze kunnen in gaatjes van
de kolom. (grootte van moleculen)
4. Ion-exchange elektrostatische interactie stationaire fase heeft een
lading (bvb -), geladen stoffen komen langs kolom, + lading heeft meer
affiniteit met de – kolom. (ionen verwisseling van + en -)
, 5. Biologische affiniteit (antilichamen bvb met antigenen) het analiet in
het monster die veel affiniteit heeft met het antilichaam blijft langer in
de kolom.
- Repeated partition 1 monster injecteren, maar
meerdere componenten. Elk monster gaat door de
kolom heen maar dit gaat in stappen.
Informatie uit een chromatogram
- Stoffen worden in de kolom gescheiden.
- X-as = retentietijd (minuten)
- Y-as = signaal detector (eenheid afhankelijk van soort detector)
- Eigenschappen pieken:
Hoogte
Oppervlakte meest geschikte maat om concentratie van een
analiet te bepalen.
Vorm (breedte, symmetrie)
- Redenen waarom een stof niet te zien is in het chromatogram:
Niet lang genoeg gewacht.
Detector is niet goed ingesteld
(bvb golflengte bij UV-vis)
En nog meerdere redenen.
- tr = Retentietijd
- tm = Retentietijd van een onvertraagde
component tijd van het verblijf in de
mobiele fase.
- t’r = Netto retentietijd hele retentietijd
- tm
Welke technieken voor welke analiet vuistregels GC of RP-HPLC
- RP (reversed phase kolom) apolaire kolom.
- Normal phase kolom polaire kolom.
GC met een FID (flame ionisation HPLC met UV-VIS detector en RP-
detector) kolom
Gas (~1 ml) of vloeistof (~1 ul) Opgeloste monsters (liefst in mobiele
fase)
Vluchtige monsters (want Niet super polair (geen retentie)
verdampen bij injector)
Monster zonder water (kolom kan Niet super apolair (te veel retentie en
daar niet tegen) niet meer van kolom af)
Analiet met C-atomen (FID ziet Geschikt voor veel stoffen met
anders niks) gemiddelde polariteit.
Een gaschromatograaf (GC)
- Draaggas mobiele fase.
- Injector monster komt hierin.
- Kolom hier wordt het monster
gescheiden.
Basis, chromatografie en de aard van de fases.
- Concept scheidingsmethode met mobiele en stationaire fase.
- Stationaire fase staat stil (kolom)
- Mobiele fase loopt door de stationaire fase heen (eluens)
- De stof die langer in de kolom blijft ondervind meer retentie, door verschil
in retentie ontstaat de scheiding.
Retentiemechanismes en repaeted partition
- Hoe meer affiniteit de analiet heeft met de kolom, hoe later deze eruit
komt.
- Retentiemechanismes zijn verantwoordelijk voor de verschillen in
retentie die verschillende analieten ondervinden op een kolom. (5
retentiemechanismes)
1. Adsorptie Analieten met meer affiniteit voor de stationaire fase
blijven hier langer inzitten. (adsorptie analiet aan kolom)
2. Partition (verdeling) Er vormt zich een evenwicht tussen hoe veel tijd
een monster zich in de mobiele of stationaire fase zal bevinden.
(monster kan in beide fases gaan zitten) (verdeling opgeloste stoffen
tussen 2 vloeistoffases)
3. Size-exclusion Moleculaire zeefwerking een monster wordt
aangebracht met moleculen van verschillende groottes, kleine
moleculen ondervinden meer retentie want deze kunnen in gaatjes van
de kolom. (grootte van moleculen)
4. Ion-exchange elektrostatische interactie stationaire fase heeft een
lading (bvb -), geladen stoffen komen langs kolom, + lading heeft meer
affiniteit met de – kolom. (ionen verwisseling van + en -)
, 5. Biologische affiniteit (antilichamen bvb met antigenen) het analiet in
het monster die veel affiniteit heeft met het antilichaam blijft langer in
de kolom.
- Repeated partition 1 monster injecteren, maar
meerdere componenten. Elk monster gaat door de
kolom heen maar dit gaat in stappen.
Informatie uit een chromatogram
- Stoffen worden in de kolom gescheiden.
- X-as = retentietijd (minuten)
- Y-as = signaal detector (eenheid afhankelijk van soort detector)
- Eigenschappen pieken:
Hoogte
Oppervlakte meest geschikte maat om concentratie van een
analiet te bepalen.
Vorm (breedte, symmetrie)
- Redenen waarom een stof niet te zien is in het chromatogram:
Niet lang genoeg gewacht.
Detector is niet goed ingesteld
(bvb golflengte bij UV-vis)
En nog meerdere redenen.
- tr = Retentietijd
- tm = Retentietijd van een onvertraagde
component tijd van het verblijf in de
mobiele fase.
- t’r = Netto retentietijd hele retentietijd
- tm
Welke technieken voor welke analiet vuistregels GC of RP-HPLC
- RP (reversed phase kolom) apolaire kolom.
- Normal phase kolom polaire kolom.
GC met een FID (flame ionisation HPLC met UV-VIS detector en RP-
detector) kolom
Gas (~1 ml) of vloeistof (~1 ul) Opgeloste monsters (liefst in mobiele
fase)
Vluchtige monsters (want Niet super polair (geen retentie)
verdampen bij injector)
Monster zonder water (kolom kan Niet super apolair (te veel retentie en
daar niet tegen) niet meer van kolom af)
Analiet met C-atomen (FID ziet Geschikt voor veel stoffen met
anders niks) gemiddelde polariteit.
Een gaschromatograaf (GC)
- Draaggas mobiele fase.
- Injector monster komt hierin.
- Kolom hier wordt het monster
gescheiden.
