WEEFSELS – Weefselkweek, bloed – Hoorcollege 18-20 – 2017/2018
Hoorcollege 18 – Weefselkweek – Weefsels (29-05-2018)
Weefselkweek
Techniek om cellen buiten het organisme in leven te houden.
In vitro = ‘In glas’.
Doel:
Cellen in leven houden.
Behoud van celfuncte.
Vermogen tot diferentate.
Voordelen weefselkweek
Standaardiseren en manipuleren van het milieu: pH, temperatuur, osmotsche aarde,
zuurstofspanning, koolstofdioxidespanning.
Bestuderen van directe efect van stofen op cellen.
Bestuderen van levende cellen op elk ge enst moment.
Homogene celpopulates.
Minder proefdieren.
Nadelen weefselkweek
Cellen in een kunstmatg milieu.
De aanvoer van voedingsstofen ordt anders geregeld.
De afvoer van afvalproducten ordt anders geregeld.
Cellen gedragen zich in vitro anders dan in vivo.
Cellen van een contnue lijn zijn getransformeerd. Af ijkende chromosoominhoud.
Noodzaak voor:
Specifeke apparatuur.
Steriel erken.
Hoge kosten.
Serum
Serum is bloedplasma zonder stollingsfactoren. Serum bevat geen bloedplaatjes,
rode bloedcellen, ite bloedcellen en stollingsfactoren.
Serum bevat:
Nutriënten.
Adhesiefactoren.
Groeifactoren.
Ei iten.
Hormonen.
Hybridoma’s
Hybridoma’s = Fusies van B-cellen en myeloma’s.
1. Injecte muis met antgeen.
2. Isolate plasmacellen uit milt.
3. Plasmacellen en myeloma’s defciënt maken voor elk één enzym.
1
, 4. Fusie.
5. K eken hybridoma’s in medium, aarin beide enzymen nodig zijn. Alleen de hybridoma’s zullen
overleven.
6. Overlevende echte hybridoma’s orden gek eekt.
7. Controle op producte antlichamen.
8. Selecte.
9. Doork eken cellijnen (contnuu.
Typen ‘weefselkweek’
Weefselk eek.
Orgaank eek.
Celk eek.
Weefselk eek
Deorganisate van de 3D structuur.
Losse cellen migreren als eerst het eefsel uit.
Meerdere celtypen in de k eek. Echter zijn dit niet alle
cellen uit het eefsel.
Representate van het eefsel, maar niet meer de
originele structuur van het eefsel.
Een stukje eefsel ordt op een plaatje gebracht. Sommige cellen migreren het eefsel uit en verspreiden
zich over de bodem van het plaatje.
Orgaank eek
Structuur en histologische knemerken behouden, doordat
migrate ordt voorkomen.
Steady-state.
Kortdurende k eken.
Migrate van cellen uit het eefsel ordt voorkomen door de bodem van het k eekglaasje onaantrekkelijk
te maken voor migrate (VB: Agaru. Hierdoor blijf de structuur van het eefsel behouden. Er ontstaat een
steady-state: cellen delen en migreren niet. Uiteindelijk treedt in het midden van het eefsel necrose op,
omdat dit niet goed doorbloed is. Daarom is dit een kortdurende k eek.
De structuur van het eefsel blijf behouden.
Celk eek
Eindproduct: losse cellen van één celtype in een bakje.
1. Weefsel gaat desaggregeren (uitlopenu.
2. Losse cellen ontstaan (primaire celk eeku.
3. De primaire celk eek hecht aan de bodem van een
bakje/suspensie.
4. De cellen gaan delen.
5. De cellen vormen een monolaag.
6. De cellen vertonen contact-inhibite, aardoor ze stoppen met delen.
7. De monolaag ordt gesplist: de cellen orden verdeeld over t ee nieu e bakjes (primaire cellijnu.
8. De primaire cellijn vertoont hetzelfde gedrag als de primaire celk eek: hechten, delen, monolaag,
contact-inhibite.
2
Hoorcollege 18 – Weefselkweek – Weefsels (29-05-2018)
Weefselkweek
Techniek om cellen buiten het organisme in leven te houden.
In vitro = ‘In glas’.
Doel:
Cellen in leven houden.
Behoud van celfuncte.
Vermogen tot diferentate.
Voordelen weefselkweek
Standaardiseren en manipuleren van het milieu: pH, temperatuur, osmotsche aarde,
zuurstofspanning, koolstofdioxidespanning.
Bestuderen van directe efect van stofen op cellen.
Bestuderen van levende cellen op elk ge enst moment.
Homogene celpopulates.
Minder proefdieren.
Nadelen weefselkweek
Cellen in een kunstmatg milieu.
De aanvoer van voedingsstofen ordt anders geregeld.
De afvoer van afvalproducten ordt anders geregeld.
Cellen gedragen zich in vitro anders dan in vivo.
Cellen van een contnue lijn zijn getransformeerd. Af ijkende chromosoominhoud.
Noodzaak voor:
Specifeke apparatuur.
Steriel erken.
Hoge kosten.
Serum
Serum is bloedplasma zonder stollingsfactoren. Serum bevat geen bloedplaatjes,
rode bloedcellen, ite bloedcellen en stollingsfactoren.
Serum bevat:
Nutriënten.
Adhesiefactoren.
Groeifactoren.
Ei iten.
Hormonen.
Hybridoma’s
Hybridoma’s = Fusies van B-cellen en myeloma’s.
1. Injecte muis met antgeen.
2. Isolate plasmacellen uit milt.
3. Plasmacellen en myeloma’s defciënt maken voor elk één enzym.
1
, 4. Fusie.
5. K eken hybridoma’s in medium, aarin beide enzymen nodig zijn. Alleen de hybridoma’s zullen
overleven.
6. Overlevende echte hybridoma’s orden gek eekt.
7. Controle op producte antlichamen.
8. Selecte.
9. Doork eken cellijnen (contnuu.
Typen ‘weefselkweek’
Weefselk eek.
Orgaank eek.
Celk eek.
Weefselk eek
Deorganisate van de 3D structuur.
Losse cellen migreren als eerst het eefsel uit.
Meerdere celtypen in de k eek. Echter zijn dit niet alle
cellen uit het eefsel.
Representate van het eefsel, maar niet meer de
originele structuur van het eefsel.
Een stukje eefsel ordt op een plaatje gebracht. Sommige cellen migreren het eefsel uit en verspreiden
zich over de bodem van het plaatje.
Orgaank eek
Structuur en histologische knemerken behouden, doordat
migrate ordt voorkomen.
Steady-state.
Kortdurende k eken.
Migrate van cellen uit het eefsel ordt voorkomen door de bodem van het k eekglaasje onaantrekkelijk
te maken voor migrate (VB: Agaru. Hierdoor blijf de structuur van het eefsel behouden. Er ontstaat een
steady-state: cellen delen en migreren niet. Uiteindelijk treedt in het midden van het eefsel necrose op,
omdat dit niet goed doorbloed is. Daarom is dit een kortdurende k eek.
De structuur van het eefsel blijf behouden.
Celk eek
Eindproduct: losse cellen van één celtype in een bakje.
1. Weefsel gaat desaggregeren (uitlopenu.
2. Losse cellen ontstaan (primaire celk eeku.
3. De primaire celk eek hecht aan de bodem van een
bakje/suspensie.
4. De cellen gaan delen.
5. De cellen vormen een monolaag.
6. De cellen vertonen contact-inhibite, aardoor ze stoppen met delen.
7. De monolaag ordt gesplist: de cellen orden verdeeld over t ee nieu e bakjes (primaire cellijnu.
8. De primaire cellijn vertoont hetzelfde gedrag als de primaire celk eek: hechten, delen, monolaag,
contact-inhibite.
2
