Biomethoden 1
Vincent Bakker & Dominique ter Maat
1
,Kwantificatie
Externe Standaard Methode
Oppervlakte standaard reprecenteerd: hoeveelheid standaard
Oppervlakte monster vergelijken met de oppervlakte standaard
Snelle methode (1 standaard), maar daardoor ook onnauwkeurig – Om een schatng te maken van de
concentrate om daarna een ijklijn te maken.
Am
C m= ∙C
As s
C = concentrate
A = Oppervlakte
M = monster
S = standaard
C standaard ∙ ∆ EI monster
C monster= ∆ EI =EI gemeten−EI blanco
∆ EI standaard
EI = Extncte
Externe kalibratielijn
Kalibratielijn bestaat uit standaarden met verschillende, bekende concentrates. De concentrate wordt
uitgezet tegen de response (afankelijk van de methode). Het monster wordt op de lijn geïnterpoleerd
IJklijn per component
Elke stof heef een eigen gevoeligheid. De gevoeligheid is afankelijk van:
Type detector
Type stof (atomen en structuur)
Concentrate (vooral in hogere range)
Matrixefecten
Gevoeligheid wordt gedefnieerd als: Verhouding tussen response en hoeveelheid
Nadelen externe kalibratie
Kleine veranderingen in parameter kunnen voor veranderingen in response zorgen, zoals: verschil in
Injectevolume, verschil in llow snelheid, een verandering in Temperatuur, een niet schone spuit of
gewoon een ander cuvet.
Interne standaard methode
Bekende hoeveelheid van een monster component toevoegen aan de standaarden en monsters.
Am
A IS A m A IS
C m= ∙ C s= ∙ ∙C
AS A IS A s s
A IS
C = concentrate
A = oppervlakte (area)
2
, M = monster
IS = interne standaard
S = standaard
Eisen aan de IS:
Goede scheiding tussen component en IS (chromatografe)
Gevoelig voor verschillende golfengten (Spectroscopie)
Chemische gelijksoortg
Concentrate IS ~ Concentrate standaard
Interne kalibratielijn
Interne standaard wordt toegevoegd aan standaarden en monsters
De concentrate wordt uitgezet tegen de verhouding tussen standaarden en IS
De concentrate wordt geïnterpoleerd op de lijn
response monster
Conc vs .
responce IS
Standaard Additie Methode
Waarom Standaard Addite:
Het is een makkelijk betrouwbare techniek die voor veiligheid kan
zorgen tjdens een onderzoek. Ook verwijdert het eventuele vervuiling
(onzuiverheden) die meegerekend zouden kunnen in grafek.
Matrixeffect
Meetwaarden worden beïnvloed door de aanwezigheid van andere
stofen in het monster
Vaak bij biologische monsters, zoals serum en urine.
Gevolg kan onbetrouwbare en onreproduceerbare resultaten zijn
Standaard Additie met
Kalibratielijn
Standaard wordt oplopend toegevoegd aan de
monsters.
De concentrate wordt uitgezet tegen de response.
De lijn wordt doorgetrokken het snijpunt met de
x-as is de concentrate in het monster.
3
Vincent Bakker & Dominique ter Maat
1
,Kwantificatie
Externe Standaard Methode
Oppervlakte standaard reprecenteerd: hoeveelheid standaard
Oppervlakte monster vergelijken met de oppervlakte standaard
Snelle methode (1 standaard), maar daardoor ook onnauwkeurig – Om een schatng te maken van de
concentrate om daarna een ijklijn te maken.
Am
C m= ∙C
As s
C = concentrate
A = Oppervlakte
M = monster
S = standaard
C standaard ∙ ∆ EI monster
C monster= ∆ EI =EI gemeten−EI blanco
∆ EI standaard
EI = Extncte
Externe kalibratielijn
Kalibratielijn bestaat uit standaarden met verschillende, bekende concentrates. De concentrate wordt
uitgezet tegen de response (afankelijk van de methode). Het monster wordt op de lijn geïnterpoleerd
IJklijn per component
Elke stof heef een eigen gevoeligheid. De gevoeligheid is afankelijk van:
Type detector
Type stof (atomen en structuur)
Concentrate (vooral in hogere range)
Matrixefecten
Gevoeligheid wordt gedefnieerd als: Verhouding tussen response en hoeveelheid
Nadelen externe kalibratie
Kleine veranderingen in parameter kunnen voor veranderingen in response zorgen, zoals: verschil in
Injectevolume, verschil in llow snelheid, een verandering in Temperatuur, een niet schone spuit of
gewoon een ander cuvet.
Interne standaard methode
Bekende hoeveelheid van een monster component toevoegen aan de standaarden en monsters.
Am
A IS A m A IS
C m= ∙ C s= ∙ ∙C
AS A IS A s s
A IS
C = concentrate
A = oppervlakte (area)
2
, M = monster
IS = interne standaard
S = standaard
Eisen aan de IS:
Goede scheiding tussen component en IS (chromatografe)
Gevoelig voor verschillende golfengten (Spectroscopie)
Chemische gelijksoortg
Concentrate IS ~ Concentrate standaard
Interne kalibratielijn
Interne standaard wordt toegevoegd aan standaarden en monsters
De concentrate wordt uitgezet tegen de verhouding tussen standaarden en IS
De concentrate wordt geïnterpoleerd op de lijn
response monster
Conc vs .
responce IS
Standaard Additie Methode
Waarom Standaard Addite:
Het is een makkelijk betrouwbare techniek die voor veiligheid kan
zorgen tjdens een onderzoek. Ook verwijdert het eventuele vervuiling
(onzuiverheden) die meegerekend zouden kunnen in grafek.
Matrixeffect
Meetwaarden worden beïnvloed door de aanwezigheid van andere
stofen in het monster
Vaak bij biologische monsters, zoals serum en urine.
Gevolg kan onbetrouwbare en onreproduceerbare resultaten zijn
Standaard Additie met
Kalibratielijn
Standaard wordt oplopend toegevoegd aan de
monsters.
De concentrate wordt uitgezet tegen de response.
De lijn wordt doorgetrokken het snijpunt met de
x-as is de concentrate in het monster.
3
