Zuivering van β-galactosidase
,Inhoudsopgave
Bladzijde
Inleiding 2-5
Methode 5
Resultaten 8
Discussie 11
Conclusie 13
Bronnen 14
Bijlage 15
Inleiding
β-galactosidase is een menselijk enzym dat een belangrijke rol speelt in de
afbraak van lactose. β-galactosidase hydrolyseert lactose tot de monosachariden
, glucose en galactose (Salehi et al., 2008) (Ishikawa et al., 2015). De afbraak van
lactose is cruciaal voor de vertering van zuivelproducten. Bij mensen met
lactose-intolerantie is β-galactosidase van belang, aangezien het potentie heeft
hen te helpen om lactose af te breken en zo de consumptie van zuivelproducten
te vergemakkelijken (Salehi et al., 2008) (Ishikawa et al., 2015). β-galactosidase
kan ingezet worden als vervanging voor lactase, een enzym dat bij mensen met
lactose-intolerantie onvoldoende aanwezig is. Om β-galactosidase echter
bruikbaar te maken voor eventuele industriële en therapeutische toepassingen, is
een zuivere vorm van het enzym vereist. Het verkrijgen van een zuiver β-
galactosidase vormt een uitdaging en vereist een combinatie van biotechnologie
en analytische zuiveringstechnieken.
In dit onderzoek worden B21 E. Coli stammen getransformeerd met een voor
humaan β-galactosidase coderend plasmide: pIVEX-LacZHis. Op dit plasmide
bevat verder onder andere een His-tag. Het zuiveringsproces bevat verschillende
stappen, waaronder lysaat bemachtiging en zuivering door onder andere
affiniteitschromatografie. Het doel van deze studie is het zuiveren van β-
galactosidase uit het lysaat en de zuiveringseffectiviteit vast te stellen. De
hoofdvraag luidt:
Hoe effectief is de zuivering van β-galactosidase uit E. coli? Om de hoofdvraag te
beantwoorden is gekeken naar:
1. Activiteit: Hoeveel β-galactosidase is aanwezig na elke zuiveringsstap?
2. Concentratie: Wat is de hoeveelheid β-galactosidase-eiwit in de monsters?
3. Zuiverheid: In hoeverre zijn andere eiwitten verwijderd tijdens de
zuiveringsprocedure?
Om de onderzoeksvraag te beantwoorden, wordt gebruikgemaakt van de
volgende practica:
1. Lysaatverkrijging
Door middel van transfectie werd het gen voor β-galactosidase met een His-tag
ingebracht in een E. coli-stam (BL21). De expressie van het enzym wordt
,Inhoudsopgave
Bladzijde
Inleiding 2-5
Methode 5
Resultaten 8
Discussie 11
Conclusie 13
Bronnen 14
Bijlage 15
Inleiding
β-galactosidase is een menselijk enzym dat een belangrijke rol speelt in de
afbraak van lactose. β-galactosidase hydrolyseert lactose tot de monosachariden
, glucose en galactose (Salehi et al., 2008) (Ishikawa et al., 2015). De afbraak van
lactose is cruciaal voor de vertering van zuivelproducten. Bij mensen met
lactose-intolerantie is β-galactosidase van belang, aangezien het potentie heeft
hen te helpen om lactose af te breken en zo de consumptie van zuivelproducten
te vergemakkelijken (Salehi et al., 2008) (Ishikawa et al., 2015). β-galactosidase
kan ingezet worden als vervanging voor lactase, een enzym dat bij mensen met
lactose-intolerantie onvoldoende aanwezig is. Om β-galactosidase echter
bruikbaar te maken voor eventuele industriële en therapeutische toepassingen, is
een zuivere vorm van het enzym vereist. Het verkrijgen van een zuiver β-
galactosidase vormt een uitdaging en vereist een combinatie van biotechnologie
en analytische zuiveringstechnieken.
In dit onderzoek worden B21 E. Coli stammen getransformeerd met een voor
humaan β-galactosidase coderend plasmide: pIVEX-LacZHis. Op dit plasmide
bevat verder onder andere een His-tag. Het zuiveringsproces bevat verschillende
stappen, waaronder lysaat bemachtiging en zuivering door onder andere
affiniteitschromatografie. Het doel van deze studie is het zuiveren van β-
galactosidase uit het lysaat en de zuiveringseffectiviteit vast te stellen. De
hoofdvraag luidt:
Hoe effectief is de zuivering van β-galactosidase uit E. coli? Om de hoofdvraag te
beantwoorden is gekeken naar:
1. Activiteit: Hoeveel β-galactosidase is aanwezig na elke zuiveringsstap?
2. Concentratie: Wat is de hoeveelheid β-galactosidase-eiwit in de monsters?
3. Zuiverheid: In hoeverre zijn andere eiwitten verwijderd tijdens de
zuiveringsprocedure?
Om de onderzoeksvraag te beantwoorden, wordt gebruikgemaakt van de
volgende practica:
1. Lysaatverkrijging
Door middel van transfectie werd het gen voor β-galactosidase met een His-tag
ingebracht in een E. coli-stam (BL21). De expressie van het enzym wordt
