Bepaling van aspir ine concentratie voor
gemeten 50% remming fosfolipase A2 activiteit
gebruikmakend van fluorescente assay
B iochem : Het effect van acetylsalicylzuur (Aspirine) op fosfolipase A2
Cur sus : Basispracticum FAR
, Docent: Oscar van Linden
Introductie
Aspirine is een medicijn dat helpt tegen verschillende kwalen. Het werkt pijnstillend,
ontstekingsremmend en koortsverlagend dankzij de actieve stof acetylsalicylzuur 1. Deze stof
bindt in het menselijk lichaam onder andere aan het enzym fosfolipase A2. Dat normaal
gesproken fosfolipiden omzet in arachidonzuur. Arachidonzuur is een bouwsteen voor
prostaglandines. Dit zijn hormoonachtige stoffen die een rol spelen bij pijn, ontstekingen en
koorts. Een deel van hun functie is het stimuleren van het voelen van pijn2.
In dit experiment wordt onderzocht in hoeverre aspirine in staat is om fosfolipase A2 te
remmen. Dit gebeurt door de concentratie te bepalen die nodig is om 50% van de
enzymactiviteit te remmen, ook wel de Inhibitory Concentratie 50% (IC50%) genoemd. De
IC50% is een maat voor de hoeveelheid remming een stof kan veroorzaken. Voor dit
onderzoek wordt gebruikgemaakt van fluorescente assay, waarbij zowel commerciële
aspirine en zelf gesynthetiseerde aspirine uit eerder experiment wordt getest. Fosfolipase A2
wordt hierbij omgezet tot een fluorescent molecuul zodat de enzymactiviteit gemeten kan
worden aan de mate van fluorescentie. Zie figuur 2 voor de omzetting van Fosfolipase A2 in
een fluorescent product.
Figuur 1: Reactie tussen substraat en fosfolipase A2 waarbij het fluorescent product ontstaat .3
De analyse van dit experiment zal gebeuren door de enzymactiviteit, uitgedrukt als
percentage, uit te zetten tegen de concentratie aspirine in een grafiek. Dit zal resulteren in
een inhibitie curve waaruit de IC50-waarde van aspirine bepaald kan worden. Als resultaat
uit de analyse wordt verwacht dat er één specifieke concentratie aspirine is met IC50%.
Waarbij de remming van fosfolipase A2 toeneemt bij toename aspirine concentratie. 3
1https://www.pijn.nl/behandelingen/medicamenteuze-behandeling/anti-inflammatoir.html#:~:text=Prostaglandines%20stimuleren%20de
%20waarneming%20van,)%2C%20kunnen%20er%20bijwerkingen%20ontstaan. (publicatie nvt. geraadpleegd op 28/11/24
2 https://db.cbg-meb.nl/bijsluiters/h01414.pdf (publicatie 24/08/24. raadpleegd op 28/11/24)
3 Labbuddy: Medchem/Biochem introductie (geraadpleegd op 28/11/24)
1
gemeten 50% remming fosfolipase A2 activiteit
gebruikmakend van fluorescente assay
B iochem : Het effect van acetylsalicylzuur (Aspirine) op fosfolipase A2
Cur sus : Basispracticum FAR
, Docent: Oscar van Linden
Introductie
Aspirine is een medicijn dat helpt tegen verschillende kwalen. Het werkt pijnstillend,
ontstekingsremmend en koortsverlagend dankzij de actieve stof acetylsalicylzuur 1. Deze stof
bindt in het menselijk lichaam onder andere aan het enzym fosfolipase A2. Dat normaal
gesproken fosfolipiden omzet in arachidonzuur. Arachidonzuur is een bouwsteen voor
prostaglandines. Dit zijn hormoonachtige stoffen die een rol spelen bij pijn, ontstekingen en
koorts. Een deel van hun functie is het stimuleren van het voelen van pijn2.
In dit experiment wordt onderzocht in hoeverre aspirine in staat is om fosfolipase A2 te
remmen. Dit gebeurt door de concentratie te bepalen die nodig is om 50% van de
enzymactiviteit te remmen, ook wel de Inhibitory Concentratie 50% (IC50%) genoemd. De
IC50% is een maat voor de hoeveelheid remming een stof kan veroorzaken. Voor dit
onderzoek wordt gebruikgemaakt van fluorescente assay, waarbij zowel commerciële
aspirine en zelf gesynthetiseerde aspirine uit eerder experiment wordt getest. Fosfolipase A2
wordt hierbij omgezet tot een fluorescent molecuul zodat de enzymactiviteit gemeten kan
worden aan de mate van fluorescentie. Zie figuur 2 voor de omzetting van Fosfolipase A2 in
een fluorescent product.
Figuur 1: Reactie tussen substraat en fosfolipase A2 waarbij het fluorescent product ontstaat .3
De analyse van dit experiment zal gebeuren door de enzymactiviteit, uitgedrukt als
percentage, uit te zetten tegen de concentratie aspirine in een grafiek. Dit zal resulteren in
een inhibitie curve waaruit de IC50-waarde van aspirine bepaald kan worden. Als resultaat
uit de analyse wordt verwacht dat er één specifieke concentratie aspirine is met IC50%.
Waarbij de remming van fosfolipase A2 toeneemt bij toename aspirine concentratie. 3
1https://www.pijn.nl/behandelingen/medicamenteuze-behandeling/anti-inflammatoir.html#:~:text=Prostaglandines%20stimuleren%20de
%20waarneming%20van,)%2C%20kunnen%20er%20bijwerkingen%20ontstaan. (publicatie nvt. geraadpleegd op 28/11/24
2 https://db.cbg-meb.nl/bijsluiters/h01414.pdf (publicatie 24/08/24. raadpleegd op 28/11/24)
3 Labbuddy: Medchem/Biochem introductie (geraadpleegd op 28/11/24)
1
