Samenvatting moleculaire biologie H2: DNA replicatie
Menselijke diploïde cel = 6,6 109 basenparen aan genoom
E.Coli = 4,5 106 basenparen aan genoom (Circulair genoom)
Er moet veel gerepliceerd worden
Hoe zou de Replicatie kunnen gebeuren?
Watson en Crick: Dubbele strengen gaan uit elkaar en elke streng krijgt
een complementaire streng
Er zijn drie mogelijkheden van Replicatie
1. Conservatief: Kopie van DNA helix. Het DNA blijft bestaan en er wordt een
nieuwe kopie gemaakt. Beide strengen met oude DNA wordt doorgegeven aan
de dochtercellen
2. Semi-conservatief (half behoudend): twee DNA strengen gaan uiteen en
er wordt een nieuwe streng gemaakt die complementair is. De helft van het
oude DNA wordt doorgegeven aan de dochtercel en er wordt een nieuwe
streng gemaakt.
3. Dispersief: Een deeltje van het oude DNA wordt doorgegeven aan de
dochtercellen en een deeltje DNA wordt opnieuw aangemaakt.
Experiment om te krijgen welke manier de werkelijkheid is:
Staal van E.Coli
Eerste Opstelling = E.Coli homogeniseren en mengen van Cesium Chloride
Homogenaat centrifugeren
Gradiënt van Cesium Chloride: Veel van beneden en lager van boven
DNA gaat zich bevinden met zijn gradiënt in de proefbuis (Fijn bandje DNA)
DNA bevat veel stikstoffen
Meest voorkomende Stikstof: N14
, Zwaardere isotoop: N15
Tweede Opstelling = Andere E.Coli: Opgegroeid in medium met enkel N15
Zwaarder
Derde Opstelling = DAARNA: De Tweede E.Coli (die eerst N15 had)
overbrengen naar een medium met enkel N14 Vervolgens 1 keer Repliceren
Het DNA in de proefbuis bevindt zich tussen het DNA van 1 en 2
Vierde Opstelling = De Tweede E.Coli (die eerst N15 had) opnieuw overbrengen
naar een medium met enkel N14 MAAR nu 2 keer laten Repliceren
Conclusie: Semi-Conservatief
Enzymen die belangrijk zijn bij de DNA Replicatie
DNA Polymerasen = Maken DNA polymeren
Ze kunnen op basis van dNTP’s (= Bevat drie fosfaten) DNA maken
DNA bevat maar 1 fosfaat dus er moeten 2 fosfaten afgeknipt worden
POLYMERISATIE = 5’ 3’
3’ OH uiteinde nodig
Maken soms fouten → Ze kunnen zelf fouten herstellen (= Proofreading)
1. Als de basen juist zijn: dan ligt de strand in het polymerase centrum
2. Als er een fout wordt
gemaakt (foute basen ten
opzichte van elkaar): dan ligt
de strand uit het polymerase
centrum
Menselijke diploïde cel = 6,6 109 basenparen aan genoom
E.Coli = 4,5 106 basenparen aan genoom (Circulair genoom)
Er moet veel gerepliceerd worden
Hoe zou de Replicatie kunnen gebeuren?
Watson en Crick: Dubbele strengen gaan uit elkaar en elke streng krijgt
een complementaire streng
Er zijn drie mogelijkheden van Replicatie
1. Conservatief: Kopie van DNA helix. Het DNA blijft bestaan en er wordt een
nieuwe kopie gemaakt. Beide strengen met oude DNA wordt doorgegeven aan
de dochtercellen
2. Semi-conservatief (half behoudend): twee DNA strengen gaan uiteen en
er wordt een nieuwe streng gemaakt die complementair is. De helft van het
oude DNA wordt doorgegeven aan de dochtercel en er wordt een nieuwe
streng gemaakt.
3. Dispersief: Een deeltje van het oude DNA wordt doorgegeven aan de
dochtercellen en een deeltje DNA wordt opnieuw aangemaakt.
Experiment om te krijgen welke manier de werkelijkheid is:
Staal van E.Coli
Eerste Opstelling = E.Coli homogeniseren en mengen van Cesium Chloride
Homogenaat centrifugeren
Gradiënt van Cesium Chloride: Veel van beneden en lager van boven
DNA gaat zich bevinden met zijn gradiënt in de proefbuis (Fijn bandje DNA)
DNA bevat veel stikstoffen
Meest voorkomende Stikstof: N14
, Zwaardere isotoop: N15
Tweede Opstelling = Andere E.Coli: Opgegroeid in medium met enkel N15
Zwaarder
Derde Opstelling = DAARNA: De Tweede E.Coli (die eerst N15 had)
overbrengen naar een medium met enkel N14 Vervolgens 1 keer Repliceren
Het DNA in de proefbuis bevindt zich tussen het DNA van 1 en 2
Vierde Opstelling = De Tweede E.Coli (die eerst N15 had) opnieuw overbrengen
naar een medium met enkel N14 MAAR nu 2 keer laten Repliceren
Conclusie: Semi-Conservatief
Enzymen die belangrijk zijn bij de DNA Replicatie
DNA Polymerasen = Maken DNA polymeren
Ze kunnen op basis van dNTP’s (= Bevat drie fosfaten) DNA maken
DNA bevat maar 1 fosfaat dus er moeten 2 fosfaten afgeknipt worden
POLYMERISATIE = 5’ 3’
3’ OH uiteinde nodig
Maken soms fouten → Ze kunnen zelf fouten herstellen (= Proofreading)
1. Als de basen juist zijn: dan ligt de strand in het polymerase centrum
2. Als er een fout wordt
gemaakt (foute basen ten
opzichte van elkaar): dan ligt
de strand uit het polymerase
centrum
