Ijzergehalte in serum en totale ijzerbindingscapaciteit bepaling.
Naam; Dilara
Klas; VL2H10
Datum van uitvoering; 24-04-2014
Doel
Met behulp van een ijklijn bepalen of het serum en de totale bindingscapaciteit binnen de
referentie waarden liggen. Voor het serum geldt 11-32 μmol/ l als referentiewaarden en voor
de totale bindingscapaciteit geldt 45-72 μmol/l. En het berekenen wat de totale
ijzerbindingscapaciteit is.
Hypothese
Dat het serum tussen de referentiewaarden ligt (11-32 μmol/ l), dat de totale
bindingscapaciteit tussen de referentiewaarden ligt (45-72 μmol/l) en dat de totale
ijzerbindings percentage tussen de 24,4 – 44,0% ligt.
Samenvatting
Er wordt doormiddel van een ijklijn de concentratie van twee onbekende monsters bepaald.
Deze moeten tussen de referentiewaarden liggen. Hiervoor wordt bij materiaal en methode
beschreven hoe we aan de ijklijn zijn gekomen doormiddel van een pipeteerschema. Waarna
de resultaten weergegeven zullen worden waaruit een conclusie en discussie volgen.
Inleiding
Ijzer komt, in de vorm van hemoglobine-ijzer, veel in het bloed voor. De concentratie van
hemoglobine wordt uitgedrukt in mmol hemoglobine- ijzer per liter. Normaal is er ongeveer
10 mmol hemoglobine- ijzer per liter bloed aanwezig. In het serum (of plasma) heerst een
lage ijzerconcentratie, ongeveer 20μmol/l.
Bij het vervoeren van ijzer door het bloed is het transporteiwit , transferrine, van bellang. Dit
eiwit kan meer ijzer vervoeren dan wat het lichaam eigenlijk te bieden heeft. Dit heeft tot
gevolg dat transferrine dan maar gedeeltelijk verzadigd is. Door het toevoegen van
ijzer(3+)ionen aan het serum en de niet gebonden overmaat vervolgens weer te verwijderen,
kan via een ijzerbepaling de totale ijzerbindingscapaciteit bepaald worden.
Dit wordt met behulp van de spectrofotometer gemeten. Hiervoor wordt een ijklijn gebruikt
waarbij de extinctie tegen de concentratie wordt gezet. Deze concentraties zijn al bekend
waardoor er ook zo de concentraties van de 2 onbekende monsters bepaald kunnen worden.
1
,Materiaal & methode
Zie; blokboek VL2H blok 4, 2014, blz. 87-91.
In tabel 1 is het pipeteerschema voor TYBC weergegeven, in tabel 2 het pipetteerschema
van de bepaling, in tabel 3 is weergegeven hoe de standaarden zijn gemaakt en vervolgens
hoe de werkoplossingen gemaakt zijn.
Tabel 1. Pipeteerschema TYBC
Stof Hoeveelheid
serum 200uL
FeCl3 400 uL
5 min incuberen
Mgco3 40 mg
In de schudmachine 30 minuten
Centrifugeren 5 mi 3000 toeren
Supernant in nieuwe buis pipetteren
Tabel 2. Pipetterschema bepaling.
Cuvet 1&2 3&4 5a & 5b 6a & 6b 7a & 7b 8
serum 200 ul
TYBC 200 ul
20 uMol/l 200 ul
40 uMol/l 200 ul
80 uMol/l 200 ul
aquadest 200 ul
Glycerine- 500 ul 500 ul 500 ul 500 ul 500 ul
thiogyzolzuur
5min + E1 Bij 565nm
meng meten
Ferrozine 20 ul 20 ul 20 ul 20 ul 20 ul 20 ul
Mengen+ parafilm + E2 Bij 565nm
meten
Tabel 3: standaarden
standaard ijzeroplossing Hcl
20 uMol/l (cuvet 5a en 5b) 5 995
40 uMol/l (cuvet 6a en 6b) 10 990
80 uMol/l (cuvet 7a en 7b) 20 980
Werkoplossingen:
Deze werkoplossingen zijn gemaakt door Maaike en Ruth voor de hele klas.
- Ferrychloride werkoplossing: 1ml stockoplossing aanvullen tot 100 ml.
- Stock werkoplossing: 0,004*482,19=0,1929 g = 192,9 mg aanvullen tot 100 ml
(precies afgewogen).
2
, Resultaten
Tabel 4: Extinctie waarden
Nummer E1 E2 E2-E1 - Blanco’s Gemiddeld
(gebruikt
voor ijklijn.
figuur 1.)
1 0,296 0,393 0,097 0.097-0.030= 0.067 -
2 0,373 0,426 0,053 0,053-0,030= 0,023 -
3 0,100 0,355 0,255 0,255-0,030= 0,225 -
4 0,123 0,468 0,345 0,345-0,030= 0,315 -
5a 0,006 0,221 0,215 0,215-0,030= 0,185
5b 0.009 0,221 0,212 0,212-0,030= 0,182 0,183
6a 0,008 0,367 0,359 0,359-0,030= 0,329
6b 0,009 0,366 0,357 0,357-0,030= 0,327 0,328
7a 0,005 0,759 0,754 0,754-0,030= 0,724
7b 0,009 0,754 0,745 0,745-0,030= 0,715 0,720
8 0,003 0,033 0,030 - -
ijzerbinding bepaling
0.8
0.7 y = 0.0086x + 0.0128
R² = 0.9944
0.6
0.5
extinctie
0.4
ect.
0.3
Linear (ect.)
0.2
0.1
0
0 20 40 60 80 100
concentratie μmol/l
Figuur 1. Ijklijn van de standaarden weergegeven als gemiddeld bij tabel 4.
Bepaling concentratie serum 0.067 (cuvet 1) en 0.023 (cuvet 2)
Gebruikt 0.067
0.023 verwaarlossd door dat het een uitbijter is.
Y= 0.0086x + 0.0218
0.067= 0.0086x + 0.0128
-0.0086x = 0.0128 – 0.067
-0.0086x= -0.0488
X= -0.0488/ -0.0086
X= 5.674
Concentratie serum is 5.67 μmol/l 3
Naam; Dilara
Klas; VL2H10
Datum van uitvoering; 24-04-2014
Doel
Met behulp van een ijklijn bepalen of het serum en de totale bindingscapaciteit binnen de
referentie waarden liggen. Voor het serum geldt 11-32 μmol/ l als referentiewaarden en voor
de totale bindingscapaciteit geldt 45-72 μmol/l. En het berekenen wat de totale
ijzerbindingscapaciteit is.
Hypothese
Dat het serum tussen de referentiewaarden ligt (11-32 μmol/ l), dat de totale
bindingscapaciteit tussen de referentiewaarden ligt (45-72 μmol/l) en dat de totale
ijzerbindings percentage tussen de 24,4 – 44,0% ligt.
Samenvatting
Er wordt doormiddel van een ijklijn de concentratie van twee onbekende monsters bepaald.
Deze moeten tussen de referentiewaarden liggen. Hiervoor wordt bij materiaal en methode
beschreven hoe we aan de ijklijn zijn gekomen doormiddel van een pipeteerschema. Waarna
de resultaten weergegeven zullen worden waaruit een conclusie en discussie volgen.
Inleiding
Ijzer komt, in de vorm van hemoglobine-ijzer, veel in het bloed voor. De concentratie van
hemoglobine wordt uitgedrukt in mmol hemoglobine- ijzer per liter. Normaal is er ongeveer
10 mmol hemoglobine- ijzer per liter bloed aanwezig. In het serum (of plasma) heerst een
lage ijzerconcentratie, ongeveer 20μmol/l.
Bij het vervoeren van ijzer door het bloed is het transporteiwit , transferrine, van bellang. Dit
eiwit kan meer ijzer vervoeren dan wat het lichaam eigenlijk te bieden heeft. Dit heeft tot
gevolg dat transferrine dan maar gedeeltelijk verzadigd is. Door het toevoegen van
ijzer(3+)ionen aan het serum en de niet gebonden overmaat vervolgens weer te verwijderen,
kan via een ijzerbepaling de totale ijzerbindingscapaciteit bepaald worden.
Dit wordt met behulp van de spectrofotometer gemeten. Hiervoor wordt een ijklijn gebruikt
waarbij de extinctie tegen de concentratie wordt gezet. Deze concentraties zijn al bekend
waardoor er ook zo de concentraties van de 2 onbekende monsters bepaald kunnen worden.
1
,Materiaal & methode
Zie; blokboek VL2H blok 4, 2014, blz. 87-91.
In tabel 1 is het pipeteerschema voor TYBC weergegeven, in tabel 2 het pipetteerschema
van de bepaling, in tabel 3 is weergegeven hoe de standaarden zijn gemaakt en vervolgens
hoe de werkoplossingen gemaakt zijn.
Tabel 1. Pipeteerschema TYBC
Stof Hoeveelheid
serum 200uL
FeCl3 400 uL
5 min incuberen
Mgco3 40 mg
In de schudmachine 30 minuten
Centrifugeren 5 mi 3000 toeren
Supernant in nieuwe buis pipetteren
Tabel 2. Pipetterschema bepaling.
Cuvet 1&2 3&4 5a & 5b 6a & 6b 7a & 7b 8
serum 200 ul
TYBC 200 ul
20 uMol/l 200 ul
40 uMol/l 200 ul
80 uMol/l 200 ul
aquadest 200 ul
Glycerine- 500 ul 500 ul 500 ul 500 ul 500 ul
thiogyzolzuur
5min + E1 Bij 565nm
meng meten
Ferrozine 20 ul 20 ul 20 ul 20 ul 20 ul 20 ul
Mengen+ parafilm + E2 Bij 565nm
meten
Tabel 3: standaarden
standaard ijzeroplossing Hcl
20 uMol/l (cuvet 5a en 5b) 5 995
40 uMol/l (cuvet 6a en 6b) 10 990
80 uMol/l (cuvet 7a en 7b) 20 980
Werkoplossingen:
Deze werkoplossingen zijn gemaakt door Maaike en Ruth voor de hele klas.
- Ferrychloride werkoplossing: 1ml stockoplossing aanvullen tot 100 ml.
- Stock werkoplossing: 0,004*482,19=0,1929 g = 192,9 mg aanvullen tot 100 ml
(precies afgewogen).
2
, Resultaten
Tabel 4: Extinctie waarden
Nummer E1 E2 E2-E1 - Blanco’s Gemiddeld
(gebruikt
voor ijklijn.
figuur 1.)
1 0,296 0,393 0,097 0.097-0.030= 0.067 -
2 0,373 0,426 0,053 0,053-0,030= 0,023 -
3 0,100 0,355 0,255 0,255-0,030= 0,225 -
4 0,123 0,468 0,345 0,345-0,030= 0,315 -
5a 0,006 0,221 0,215 0,215-0,030= 0,185
5b 0.009 0,221 0,212 0,212-0,030= 0,182 0,183
6a 0,008 0,367 0,359 0,359-0,030= 0,329
6b 0,009 0,366 0,357 0,357-0,030= 0,327 0,328
7a 0,005 0,759 0,754 0,754-0,030= 0,724
7b 0,009 0,754 0,745 0,745-0,030= 0,715 0,720
8 0,003 0,033 0,030 - -
ijzerbinding bepaling
0.8
0.7 y = 0.0086x + 0.0128
R² = 0.9944
0.6
0.5
extinctie
0.4
ect.
0.3
Linear (ect.)
0.2
0.1
0
0 20 40 60 80 100
concentratie μmol/l
Figuur 1. Ijklijn van de standaarden weergegeven als gemiddeld bij tabel 4.
Bepaling concentratie serum 0.067 (cuvet 1) en 0.023 (cuvet 2)
Gebruikt 0.067
0.023 verwaarlossd door dat het een uitbijter is.
Y= 0.0086x + 0.0218
0.067= 0.0086x + 0.0128
-0.0086x = 0.0128 – 0.067
-0.0086x= -0.0488
X= -0.0488/ -0.0086
X= 5.674
Concentratie serum is 5.67 μmol/l 3
