Naar welke elektrode zullen de eiwitten bewegen bij SDS page? Leg uit.
De eiwitten bewegen naar de positieve elektrode omdat ze zelf negatief geladen zijn.
Geef de vijf verschillende ingrediënten die in de sample buffer aanwezig zijn en leg uit
wat hun functie is.
Tris/HCL buffer, die ervoor zorgt dat de eiwitten hun lading verliezen en ontvouwen.
SDS denatureert de eiwitten en maakt ze lineair.
B-mercapoethanol verbreekt de zwavelbruggen, waardoor de eiwitten maximaal
ontvouwen.
Glycerol zorgt ervoor dat het monster onderin de slotjes zakt.
Broomfenolblauw geeft het verloop van de elektroforese aan, zodat je weet wanneer je de
run moet stoppen om te voorkomen dat de eiwitten van de gel lopen.
Waarom moet je na het starten van de elektroforese 5 tot 10 minuten de blauwe band
van de monsters in de gaten houden?
- Of de eiwitten wel gaan migreren. Is dit niet het geval dat is het contact met de
elektrode niet goed.
- Om te kijken wanneer je eiwitmonster bij de running gel is aangekomen zodat het
voltage verhoogt kan worden.
Verklaar de gasvorming die optreedt tijdens de elektroforese bij de electroden.
Er zit zuurstof en waterstof bij de elektroden wat zorgt voor elektrolyse. Als er geen bubbels
te zien zijn is het niet goed.
Leg uit hoe een stabiele pH gradiënt wordt verkregen bij IEF, en wat de functie hiervan
is.
Er kan een carrier amfolyt toegevoegd worden aan de gel voor pH gradiënt stabilisatie.
Carrier amfolyten zijn moleculen met zowel een zuur als basegroep die aan de gel worden
toegevoegd. Een pre run is wel noodzakelijk.
Wat kun je manipuleren of toevoegen aan je homogenaat om de oplosbaarheid van je
eiwitten te beïnvloeden?
- pH veranderen
- zoutconcentratie veranderen
- a polaire oplosmiddelen toevoegen
Waarin kan de homogenisatiestrategie bij het isoleren van een oplosbaar
cytoplasmatisch eiwit uit bijv. leverweefsel verschillen van de strategie bij het isoleren
van intacte organellen?
Het weefsel moet eerst kapot gemaakt worden om losse cellen te krijgen. Het is dan
belangrijk dat de organellen intact blijven.
Op welke 3 manieren kun je eiwitten laten precipiteren?
- Verhogen zoutconcentratie
- Toevoeging van apolaire oplosmiddelen
- Variatie in pH
Waarom lossen eiwitten slecht op bij een hele lage zoutconcentratie?
Doordat het eiwit hydrofoob is, zal het niet oplossen maar neerslaan.
De eiwitten bewegen naar de positieve elektrode omdat ze zelf negatief geladen zijn.
Geef de vijf verschillende ingrediënten die in de sample buffer aanwezig zijn en leg uit
wat hun functie is.
Tris/HCL buffer, die ervoor zorgt dat de eiwitten hun lading verliezen en ontvouwen.
SDS denatureert de eiwitten en maakt ze lineair.
B-mercapoethanol verbreekt de zwavelbruggen, waardoor de eiwitten maximaal
ontvouwen.
Glycerol zorgt ervoor dat het monster onderin de slotjes zakt.
Broomfenolblauw geeft het verloop van de elektroforese aan, zodat je weet wanneer je de
run moet stoppen om te voorkomen dat de eiwitten van de gel lopen.
Waarom moet je na het starten van de elektroforese 5 tot 10 minuten de blauwe band
van de monsters in de gaten houden?
- Of de eiwitten wel gaan migreren. Is dit niet het geval dat is het contact met de
elektrode niet goed.
- Om te kijken wanneer je eiwitmonster bij de running gel is aangekomen zodat het
voltage verhoogt kan worden.
Verklaar de gasvorming die optreedt tijdens de elektroforese bij de electroden.
Er zit zuurstof en waterstof bij de elektroden wat zorgt voor elektrolyse. Als er geen bubbels
te zien zijn is het niet goed.
Leg uit hoe een stabiele pH gradiënt wordt verkregen bij IEF, en wat de functie hiervan
is.
Er kan een carrier amfolyt toegevoegd worden aan de gel voor pH gradiënt stabilisatie.
Carrier amfolyten zijn moleculen met zowel een zuur als basegroep die aan de gel worden
toegevoegd. Een pre run is wel noodzakelijk.
Wat kun je manipuleren of toevoegen aan je homogenaat om de oplosbaarheid van je
eiwitten te beïnvloeden?
- pH veranderen
- zoutconcentratie veranderen
- a polaire oplosmiddelen toevoegen
Waarin kan de homogenisatiestrategie bij het isoleren van een oplosbaar
cytoplasmatisch eiwit uit bijv. leverweefsel verschillen van de strategie bij het isoleren
van intacte organellen?
Het weefsel moet eerst kapot gemaakt worden om losse cellen te krijgen. Het is dan
belangrijk dat de organellen intact blijven.
Op welke 3 manieren kun je eiwitten laten precipiteren?
- Verhogen zoutconcentratie
- Toevoeging van apolaire oplosmiddelen
- Variatie in pH
Waarom lossen eiwitten slecht op bij een hele lage zoutconcentratie?
Doordat het eiwit hydrofoob is, zal het niet oplossen maar neerslaan.
