Practicum 1
Eiwitten: gelelectroforese en kwantitatieve bepaling
, Samenvatting
Met dit practicum gebruiken we twee technieken, namelijk SDS-PAGE en spectrofotometrie. Met deze
technieken proberen we respectievelijk de molecuulmassa van een onbekend eiwit en de
eiwitconcentratie van kalverserum te bepalen.
Via de SDS-PAGE methode vonden we dat het molecuulgewicht van ons eiwit X1 85 kD is. We
konden niks verwachten, omdat we niet wisten om welk eiwit het ging.
Met de spectrofotometer hebben we bepaald dat de eiwitconcentratie in kalversereum 21 gr/l is. Ook
hier hadden we geen verwachtingen, omdat we niet van tevoren konden bedenken wat de
eiwitconcentratie zou zijn.
Inleiding
SDS-Page
SDS-PAGE staat voor Sodium Dodecyl Sulfate Poly-Acrylamide-Gel Electrophoresis. Als neutrale
bufferoplossing wordt hiervoor het zeep SDS gebruikt, dat zich non-covalent aan eiwitten hecht. De
eiwitten worden hierdoor allemaal gelijk negatief geladen en zullen door de gelelectroforese naar de
positieve pool (de anode) lopen. Als gel wordt gepolymeriseerd acrylamide gebruikt. Dit is een
fijnmazig materiaal wat lijkt op een zeef, waardoor er een scheiding wordt gemaakt op grootte van
eiwitten. De eiwitten worden zichtbaar door middel van eiwitkleuring. De eiwitten zijn met
broomfenolblauw gekleurd. Na de gelelectroforese wordt de gel met Simply Blue gewassen om de
eiwitten zichtbaar te maken. Deze kleurstof hecht zich aan de eiwitten. De uitgebreide uitleg over SDS-
PAGE staat bij de materialen en methode in dit verslag.
Het doel van dit practicum is dat we de molecuulmassa van ons onbekende eiwit X bepalen aan de
hand van de molecuulmassa's van marker-eiwitten, die we bepalen met de loopafstand in de gel.
Hiervoor gebruiken we een ijklijn.
We kounnen geen verwachtingen trekken over de molecuulmassa van het eiwit, omdat we niet weten
om welk eiwit het gaat. Wel kunnen we bedenken dat het eiwit een molecuulmassa tussen de 10 en de
250 kD heeft.
Spectrofotometrie
Bij spectrofotometrie worden moleculen bestudeerd aan de hand van hun frequentie. Het is namelijk
molecuulafhankelijk bij welke golflengte deze licht absorberen. Doordat je op een bepaalde oplossing
licht met een bepaalde golflengte straalt, waarvan deze golflengte karakteristiek is van de te bepalen
stof, kan de concentratie bepaald worden. Dit gaat aan de hand van de wet van Lambert Beer. Doordat
de stof in oplossing is, moet er eerst een blanco gemaakt worden. Hierbij wordt er een run gedaan met
alleen de oplossing, zonder stof. De uitgebreide uitleg over spectrofotometrie staat bij materialen en
methode in dit verslag.
Het doel van dit practicum is de eiwitconcentratie bepalen van kalverserum. Dit doen we door monsters
met verschillende eiwitconcentraties te kleuren en verschillende verdunningen van het kalverserum te
kleuren. Dan bepalen we door middel van spectrofotometrie de absorptie van de verschillende
eiwitconcentraties. Hiervoor gebruiken we ook een ijklijn.
Ook voor de spectrofotometrie hebben we geen verwachtingen, want we kunnen zelf niet bedenken wat
de gemiddelde eiwitconcentratie is in een stof als kalverserum.
Eiwitten: gelelectroforese en kwantitatieve bepaling
, Samenvatting
Met dit practicum gebruiken we twee technieken, namelijk SDS-PAGE en spectrofotometrie. Met deze
technieken proberen we respectievelijk de molecuulmassa van een onbekend eiwit en de
eiwitconcentratie van kalverserum te bepalen.
Via de SDS-PAGE methode vonden we dat het molecuulgewicht van ons eiwit X1 85 kD is. We
konden niks verwachten, omdat we niet wisten om welk eiwit het ging.
Met de spectrofotometer hebben we bepaald dat de eiwitconcentratie in kalversereum 21 gr/l is. Ook
hier hadden we geen verwachtingen, omdat we niet van tevoren konden bedenken wat de
eiwitconcentratie zou zijn.
Inleiding
SDS-Page
SDS-PAGE staat voor Sodium Dodecyl Sulfate Poly-Acrylamide-Gel Electrophoresis. Als neutrale
bufferoplossing wordt hiervoor het zeep SDS gebruikt, dat zich non-covalent aan eiwitten hecht. De
eiwitten worden hierdoor allemaal gelijk negatief geladen en zullen door de gelelectroforese naar de
positieve pool (de anode) lopen. Als gel wordt gepolymeriseerd acrylamide gebruikt. Dit is een
fijnmazig materiaal wat lijkt op een zeef, waardoor er een scheiding wordt gemaakt op grootte van
eiwitten. De eiwitten worden zichtbaar door middel van eiwitkleuring. De eiwitten zijn met
broomfenolblauw gekleurd. Na de gelelectroforese wordt de gel met Simply Blue gewassen om de
eiwitten zichtbaar te maken. Deze kleurstof hecht zich aan de eiwitten. De uitgebreide uitleg over SDS-
PAGE staat bij de materialen en methode in dit verslag.
Het doel van dit practicum is dat we de molecuulmassa van ons onbekende eiwit X bepalen aan de
hand van de molecuulmassa's van marker-eiwitten, die we bepalen met de loopafstand in de gel.
Hiervoor gebruiken we een ijklijn.
We kounnen geen verwachtingen trekken over de molecuulmassa van het eiwit, omdat we niet weten
om welk eiwit het gaat. Wel kunnen we bedenken dat het eiwit een molecuulmassa tussen de 10 en de
250 kD heeft.
Spectrofotometrie
Bij spectrofotometrie worden moleculen bestudeerd aan de hand van hun frequentie. Het is namelijk
molecuulafhankelijk bij welke golflengte deze licht absorberen. Doordat je op een bepaalde oplossing
licht met een bepaalde golflengte straalt, waarvan deze golflengte karakteristiek is van de te bepalen
stof, kan de concentratie bepaald worden. Dit gaat aan de hand van de wet van Lambert Beer. Doordat
de stof in oplossing is, moet er eerst een blanco gemaakt worden. Hierbij wordt er een run gedaan met
alleen de oplossing, zonder stof. De uitgebreide uitleg over spectrofotometrie staat bij materialen en
methode in dit verslag.
Het doel van dit practicum is de eiwitconcentratie bepalen van kalverserum. Dit doen we door monsters
met verschillende eiwitconcentraties te kleuren en verschillende verdunningen van het kalverserum te
kleuren. Dan bepalen we door middel van spectrofotometrie de absorptie van de verschillende
eiwitconcentraties. Hiervoor gebruiken we ook een ijklijn.
Ook voor de spectrofotometrie hebben we geen verwachtingen, want we kunnen zelf niet bedenken wat
de gemiddelde eiwitconcentratie is in een stof als kalverserum.
