APO N°10 | Inmunodiagnóstico I
APO N°10 | Inmunodiagnóstico I
Clasificación de las pruebas de inmunodiagnóstico
Las pruebas serológicas se clasifican en primarias, secundarias y terciarias esta clasificación se relaciona con
los microgramos (µg) de proteínas que cada una de estas pruebas son capaces de detectar.
Entre las pruebas primarias se encuentra las:
− Pruebas de inmunofluorescencia (microorganismos de proteína detectado por prueba 0,0005 µg
proteína/mL)
− Prueba de ELISA (microorganismos de proteína detectado por prueba 0,0005 µg proteína/mL)
− Pruebas Inmunohistoquímica (IHQ)
− Pruebas Immunoblot (IB)
Prueba de inmunofluorescencia
El fundamento de la prueba de inmunofluorescencia se basa en la detección de la unión antigeno-anticuerpo,
utilizando un conjugado que pone en evidencia esa reacción. El conjugado esta formado por el suero hiperinmune +
fluorocromo.
La visualización de la inmunofluorescencia se realiza con un microscopio de fluorescencia, este microscopio
produce un haz de luz ultravioleta que incide sobre el preparado que se encuentra en la platina y excita al
fluorocromo, el fluorocromo produce un haz de luz de una longitud de onda distinta a la que excito previamente el
fluorocromo y esta registrada por el ojo del observador.
Clasificación
Las pruebas de inmunofluorescencia se clasifican en directas (IFD) e indirectas (IFI)
Inmunobiología animal básica Página 1
, APO N°10 | Inmunodiagnóstico I
Inmunofluorescencia Indirecta (IFI)
En esta presentación observamos un portaobjeto de fluorescencia que tiene 12 áreas y en cada una de estas
áreas se encuentra el antigeno conocido, los antígenos que se utilizan en las pruebas de inmunofluorescencia son
producidos siguiendo diferentes protocolos y se ubican en las áreas que se señalan en el dibujo.
El antigeno se enfrenta entonces con el suero del animal problema, se incuba a temperatura de 37° en
términos generales y posteriormente se agrega el conjugado.
Si los anticuerpo quedaron unidos al antigeno, entonces el conjugado va a revelar la unión antigeno-
anticuerpo, en caso de que no haya anticuerpos en el suero, el conjugado va a ser lavado en el último paso
de la reacción.
Suero del animal sospechoso de padecer la enfermedad: diluciones
Previamente a colocar el suero en el portaobjeto de fluorescencia es necesario hacer diluciones del mismo y para
ello se utiliza una placa de 96 pocillos con fondo en un ‘U’ en la cual se coloca que cantidades constantes de PBS y
se realizan diferentes tipos de diluciones ya sea sobre base 2, sobre base 4, sobre base 10 siguiendo el protocolo de la
enfermedad que estamos queriendo diagnosticar.
1) En cada una de las placas se indica el número de los sueros y se los diluye en PBS, como dijimos
anteriormente.
Inmunobiología animal básica Página 2
APO N°10 | Inmunodiagnóstico I
Clasificación de las pruebas de inmunodiagnóstico
Las pruebas serológicas se clasifican en primarias, secundarias y terciarias esta clasificación se relaciona con
los microgramos (µg) de proteínas que cada una de estas pruebas son capaces de detectar.
Entre las pruebas primarias se encuentra las:
− Pruebas de inmunofluorescencia (microorganismos de proteína detectado por prueba 0,0005 µg
proteína/mL)
− Prueba de ELISA (microorganismos de proteína detectado por prueba 0,0005 µg proteína/mL)
− Pruebas Inmunohistoquímica (IHQ)
− Pruebas Immunoblot (IB)
Prueba de inmunofluorescencia
El fundamento de la prueba de inmunofluorescencia se basa en la detección de la unión antigeno-anticuerpo,
utilizando un conjugado que pone en evidencia esa reacción. El conjugado esta formado por el suero hiperinmune +
fluorocromo.
La visualización de la inmunofluorescencia se realiza con un microscopio de fluorescencia, este microscopio
produce un haz de luz ultravioleta que incide sobre el preparado que se encuentra en la platina y excita al
fluorocromo, el fluorocromo produce un haz de luz de una longitud de onda distinta a la que excito previamente el
fluorocromo y esta registrada por el ojo del observador.
Clasificación
Las pruebas de inmunofluorescencia se clasifican en directas (IFD) e indirectas (IFI)
Inmunobiología animal básica Página 1
, APO N°10 | Inmunodiagnóstico I
Inmunofluorescencia Indirecta (IFI)
En esta presentación observamos un portaobjeto de fluorescencia que tiene 12 áreas y en cada una de estas
áreas se encuentra el antigeno conocido, los antígenos que se utilizan en las pruebas de inmunofluorescencia son
producidos siguiendo diferentes protocolos y se ubican en las áreas que se señalan en el dibujo.
El antigeno se enfrenta entonces con el suero del animal problema, se incuba a temperatura de 37° en
términos generales y posteriormente se agrega el conjugado.
Si los anticuerpo quedaron unidos al antigeno, entonces el conjugado va a revelar la unión antigeno-
anticuerpo, en caso de que no haya anticuerpos en el suero, el conjugado va a ser lavado en el último paso
de la reacción.
Suero del animal sospechoso de padecer la enfermedad: diluciones
Previamente a colocar el suero en el portaobjeto de fluorescencia es necesario hacer diluciones del mismo y para
ello se utiliza una placa de 96 pocillos con fondo en un ‘U’ en la cual se coloca que cantidades constantes de PBS y
se realizan diferentes tipos de diluciones ya sea sobre base 2, sobre base 4, sobre base 10 siguiendo el protocolo de la
enfermedad que estamos queriendo diagnosticar.
1) En cada una de las placas se indica el número de los sueros y se los diluye en PBS, como dijimos
anteriormente.
Inmunobiología animal básica Página 2
