Samenvatting GZW1025 Project DNA

GZW1025: Project DNA
College 07-04: DNA project
DNA: deoxyribonucleic acid  dubbelstrengs
- Belangrijkste component in de
celkern
- Stabiele presentatie, blauwdruk, van
een organisme

RNA: ribonucleic acid  enkelstrengs
- In de kern van het cytoplasma
- Dient als overdrachtsmolecuul voor
de vertaling van de blauwdruk naar
de eiwitten

Waarom DNA zuiveren? Omdat veel
toepassingen gezuiverd DNA vereisen, en de
zuiverheid en hoeveelheid DNA (en
procedé) afhankelijk is van de beoogde toepassing. Voorbeelden van toepassingen:
- Weefseltypering voor orgaantransplantatie
- Detectie van pathogenen
- Testen van de menselijke identiteit
- Genetisch onderzoek
- Checken op een bepaalde ziekten
- Kijken of iemand/wie iets heeft aangeraakt

Uitdagingen bij het zuiveren van DNA zijn: het scheiden van DNA van andere cellulaire
componenten (eiwitten, lipiden, RNA, etc.), en het vermijden van fragmentatie van lange
DNA-moleculen door mechanische afschuiving of de werking van endogene nucleasen.
Het effectief inactiveren dan endogene nucleasen (DNase enzymen) en voorkomen dat
het genome DNA verteerd wordt is een belangrijke eerste stap in het zuiveringsproces.
DNase kan gewoonlijk worden geïnactiveerd door middel van warmte of chelerende
middelen.

Er zijn veel methoden om DNA te isoleren, maar alle manieren moeten:
- Effectief cellen dan wel weefsels kapot maken (met detergentia)
- Denatureren van eiwitten en nucleïnezuren
- Inactiviatie van endogene nucleasen
- Scheiden van nucleïnezuren van de andere componenten (RNA, eiwitten, etc.)

DNA isolatie:
- Sodium dodecylsulfaat (zeep)
- Zouten, NaCl (koppelen aan geladen groepen  oplosbaarheid)
- Isopropanol (denatureren van grote moleculen (DNA))
- Proteinase K (afbreken eiwitten)




1