Protocol 1
Restrictie analyse van de GR-YFP expressie plasmide
Benodigdheden
• hGR-YFP plasmide (220 ng/l)
• pEYFP-N1 plasmide (200 ng/l)
• Cutsmart restrictiebuffer, 10X (NEB)
• restrictie enzymen: (10 units/µl)
A. Inzetten van de restrictie digesten
Dit protocol wordt individueel uitgevoerd.
1. Bereid de reactiemengsels volgens jouw pipetteerschema.
- Welke controles moeten worden meegenomen?
- De eindconcentraties / hoeveelheden in de reactiemix zijn:
Component Eindconcentratie / hoeveelheid
Cutsmart restrictiebuffer 1X
XhoI 10 units
BamHI 10 units
Plasmide DNA: 750 ng
Milli-q H2O Aanvullen tot 20 µl
2. Meng de reactiemengsels goed en incubeer minstens 1 uur bij 37C.
B. Preparatie van de agarose gel (0,8%)
Maak per tweetal een gel.
1. Maak 800 ml 1X TAE m.b.v. de 50X TAE buffer en gedemineraliseerd water.
2. Weeg 0,8 gram agarose af in een 250 ml fles en voeg 50 ml 1X TAE toe.
Restrictie analyse van de GR-YFP expressie plasmide
Benodigdheden
• hGR-YFP plasmide (220 ng/l)
• pEYFP-N1 plasmide (200 ng/l)
• Cutsmart restrictiebuffer, 10X (NEB)
• restrictie enzymen: (10 units/µl)
A. Inzetten van de restrictie digesten
Dit protocol wordt individueel uitgevoerd.
1. Bereid de reactiemengsels volgens jouw pipetteerschema.
- Welke controles moeten worden meegenomen?
- De eindconcentraties / hoeveelheden in de reactiemix zijn:
Component Eindconcentratie / hoeveelheid
Cutsmart restrictiebuffer 1X
XhoI 10 units
BamHI 10 units
Plasmide DNA: 750 ng
Milli-q H2O Aanvullen tot 20 µl
2. Meng de reactiemengsels goed en incubeer minstens 1 uur bij 37C.
B. Preparatie van de agarose gel (0,8%)
Maak per tweetal een gel.
1. Maak 800 ml 1X TAE m.b.v. de 50X TAE buffer en gedemineraliseerd water.
2. Weeg 0,8 gram agarose af in een 250 ml fles en voeg 50 ml 1X TAE toe.
