Tentamenvragen Moleculaire
Microbiologie
Vraag 1 (Inleiding Microbiologie) Teken een typische groeicurve van een bacterie en
geef hierin de verschillende groeifasen weer.
Vraag 2 (Bacteriële Genetica) Beschrijf de regulatie van het Lac-operon door middel
van LacI en CRP.
, Vraag 3 (Microbiële eiwitsecretie) Uit welke drie onderdelen bestaan signaalpeptiden
voor Sec- en Tat-secretie? En wat is de functie van elk van deze onderdelen?
Sec Bestaat uit 3 onderdelen:
o Transmembraan kanaal SecYEG
o ATPase motor SecA brengt het naar SecYEG
o (chaperons SecB / trigger factor) = begeleider
Tat
o TatA is het poortje
o Eiwit met signaalpeptiden met twee argeninse RR die herkent wordt door het
o TatB en TatC
Vraag 4 (Schimmelgenetica)
a. In gisten en schimmels kan de functie van een bepaald gen bestudeerd worden door
middel van het maken van een disruptie- of deletie-mutant (gene-knockout). Beschrijf
kort de belangrijkste stappen die nodig zijn voor het maken en analyseren van een
deletie stam.
Je kan een deletie stam maken m.b.v homologe recombinatie. Je maakt een
selectiemarker en zorgt ervoor dat de flankerende sequentiehomologie heeft met je
target gene. Je brengt dan een DSB aan in je target gene en via homologe
recombinatie wordt dan de aangeboden sequentie gebruikt als template. Daardoor
wordt dat gen gedeleteerd en wordt vervangen door je selectiemarker.
Je kan vervolgens dan gaan screenen waar welke stammen die slectiemaker
bevatten en welke niet.
b. Er zijn twee manieren die veel gebruikt kunnen worden om DNA in schimmels in te
brengen. Wat zijn deze twee transformatie methoden en wat zijn de voor- en nadelen
van de methodes?
Methodes voor schimmel transformaties
Polyethyleen glycol (PEG)-gemedieerde transformatie van protoplasten
transformatie voor aspergillus.
o Voordeel: super veel mutaties
o Nadeel: niet gericht
o Celwand schimmel opgebouwd uit glucanen, chitine etc en tijdens
protoplasten worden er enzymen toegevoegd die de celwand afbreken.
o Protoplaste alleen in isotone omgeving anders lysis
Agrobacterium transformaties
o Is wel gericht maar je krijgt niet super veel mutaties.
Electroporatie
Gist Lithium acetate
Microbiologie
Vraag 1 (Inleiding Microbiologie) Teken een typische groeicurve van een bacterie en
geef hierin de verschillende groeifasen weer.
Vraag 2 (Bacteriële Genetica) Beschrijf de regulatie van het Lac-operon door middel
van LacI en CRP.
, Vraag 3 (Microbiële eiwitsecretie) Uit welke drie onderdelen bestaan signaalpeptiden
voor Sec- en Tat-secretie? En wat is de functie van elk van deze onderdelen?
Sec Bestaat uit 3 onderdelen:
o Transmembraan kanaal SecYEG
o ATPase motor SecA brengt het naar SecYEG
o (chaperons SecB / trigger factor) = begeleider
Tat
o TatA is het poortje
o Eiwit met signaalpeptiden met twee argeninse RR die herkent wordt door het
o TatB en TatC
Vraag 4 (Schimmelgenetica)
a. In gisten en schimmels kan de functie van een bepaald gen bestudeerd worden door
middel van het maken van een disruptie- of deletie-mutant (gene-knockout). Beschrijf
kort de belangrijkste stappen die nodig zijn voor het maken en analyseren van een
deletie stam.
Je kan een deletie stam maken m.b.v homologe recombinatie. Je maakt een
selectiemarker en zorgt ervoor dat de flankerende sequentiehomologie heeft met je
target gene. Je brengt dan een DSB aan in je target gene en via homologe
recombinatie wordt dan de aangeboden sequentie gebruikt als template. Daardoor
wordt dat gen gedeleteerd en wordt vervangen door je selectiemarker.
Je kan vervolgens dan gaan screenen waar welke stammen die slectiemaker
bevatten en welke niet.
b. Er zijn twee manieren die veel gebruikt kunnen worden om DNA in schimmels in te
brengen. Wat zijn deze twee transformatie methoden en wat zijn de voor- en nadelen
van de methodes?
Methodes voor schimmel transformaties
Polyethyleen glycol (PEG)-gemedieerde transformatie van protoplasten
transformatie voor aspergillus.
o Voordeel: super veel mutaties
o Nadeel: niet gericht
o Celwand schimmel opgebouwd uit glucanen, chitine etc en tijdens
protoplasten worden er enzymen toegevoegd die de celwand afbreken.
o Protoplaste alleen in isotone omgeving anders lysis
Agrobacterium transformaties
o Is wel gericht maar je krijgt niet super veel mutaties.
Electroporatie
Gist Lithium acetate
